[发明专利]一种利用天然生物絮凝剂对春雷霉素发酵菌丝进行预处理后制备微生物菌剂的方法

权利要求书

1.一种利用天然生物絮凝剂对春雷霉素发酵菌丝进行预处理后制备微生物菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）添加碱性无机钙对春雷霉素发酵菌丝进行理化参数调节后进行初步絮凝；

2）利用环保车间的生物膜池活性污泥和菌丝进行生物絮凝反应；

3）加入少量絮凝剂对发酵物进行絮凝量调整，利用板框对絮凝物料进行脱水处理，形成固体滤饼；

4）制备酵母菌和芽孢杆菌纯培养物，加入固体滤饼搅拌均匀，进行固态发酵发酵。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）中，所用的春雷霉素发酵菌丝的质量浓度为10%±2%，所述的碱性无机钙为轻质碳酸钙、氧化钙、氢氧化钙、石灰乳中的一种或几种，调节发酵菌丝的pH为4.0~4.5，搅拌均匀后，絮凝0.5h~2h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中，生物絮凝反应系统中加入正在运行的生物膜池活性污泥，污泥浓度在6000mg/L~7000mg/L之间，污泥沉降比在45%~95%之间，污泥镜检中以丝状菌为主，絮凝状态良好，加入量按菌丝体积计算的5%~15%。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中，生物絮凝反应过程温度在15℃~35℃范围内，使用循环泵进行回流搅拌，每小时回流达到0.5~1倍体积，反应8h~24h，中间监测物料离心上清比例变化，上清比例35%以上，到达反应终点。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）中，物料中加入絮凝剂为聚合氯化铝，加入量0.1kg/m³左右，调节发酵物进行絮凝量，离心测定上清液比例在45%以上；利用板框对絮凝物料进行脱水处理，形成的滤饼含水率在55%~60%，表观参数为捏在手中成型，有少量水滴或无水滴。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）中，纯培养物为来源于动物肠道的芽孢杆菌和食用酵母菌。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）中，芽孢杆菌和酵母菌纯培养物，按质量比0.5%~2.0%的接种，分别进行液体扩大培养；固体发酵的条件为：温度为25℃~45℃，湿度为45%~55%，中间每隔12h测定温度变化，生长环境pH在4.5~8.5，进行培养。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）中，芽孢杆菌和酵母菌分别进行扩大培养后，按质量比0.5%~2.0%的接种比例，同时接种，进行固体发酵。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）中，芽孢杆菌纯培养物的制备方法：取出菌种保藏斜面或保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏和扩培，37℃±0.5℃厌氧培养12h~24h；在平板下挑取一环菌体，接种至50ml的LB培养液中，在培养箱中37℃±0.5℃，180rpm，培养12h~18h；液体种子采用5%~10%的接种量，接种至1000ml的种子培养液中，在培养箱中37℃±0.5℃，180rpm，培养12h~18h，检测其菌液浓度，OD₆₀₀＞12，种子备用。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）中，酵母菌纯培养物的制备方法：取出菌种保藏斜面或保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏和扩培，37℃±0.5℃培养12h；在平板下挑取一环，接种至50ml的无抗性PDA培养液中，在培养箱中37℃±0.5℃，转速180rpm，培养10h~12h；液体种子采用5%~10%的接种量，接种至1000ml种子培养液，在培养箱中37℃±0.5℃，180rpm，培养10h~12h，检测其菌液浓度，OD₆₀₀＞14，种子备用。