[发明专利]一种杂交捕获试剂盒及利用该试剂盒进行杂交捕获的方法在审
| 申请号： | 202011299951.5 | 申请日： | 2020-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN112375809A | 公开（公告）日： | 2021-02-19 |
| 发明（设计）人： | 李芸 | 申请（专利权）人： | 天津莱贝生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6813 | 分类号： | C12Q1/6813;C12Q1/6806;C40B50/06;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 天津创信方达专利代理事务所(普通合伙) 12247 | 代理人： | 李京京 |
| 地址： | 300000 天津市武清区泗村店*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 杂交 捕获 试剂盒 利用 进行 方法 | ||
1.一种目标区域杂交捕获的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括封闭试剂、RNAInhibitor、杂交缓冲液、洗脱试剂及PCR扩增试剂；其中，所述封闭试剂包括市售HumanCot-1DNA、Salmon DNA及接头序列封闭试剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱试剂包括洗脱试剂I、洗脱试剂II及洗脱试剂III，所述洗脱试剂I由NaCl、Tris-Cl和EDTA组成，所述洗脱试剂II和洗脱试剂III均由SSC和SDS组成。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述接头序列封闭试剂为TS Mix。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括Nuclease-freewater。
5.一种利用权利要求1-4任一所述试剂盒进行杂交捕获的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)封闭接头和重复序列：向待杂交的文库中加入TS Mix以封闭接头序列，加入HumanCot-1 DNA及Salmon DNA以封闭重复DNA序列；
(2)RNA探针与目标区域的结合；
(3)杂交后文库的捕获；
(4)捕获后文库的洗脱；
(5)洗脱后文库的PCR富集及磁珠纯化。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，封闭的反应体系如下：
；
封闭的反应程序如下：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体是：当反应程序进行到第三步65℃，PAUSE时，向文库混合液中加入含有RNA探针的Hybridization Mix，控制第五步65℃，HOLD的时间在8-12h，实现探针与目标区域的特异性结合；Hybridization Mix的配制体系如下：
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)包括：用洗脱试剂I清洗Dynabeads Myone Sreptavidin T1磁珠；用洗脱试剂I重新悬浮磁珠；加入杂交产物，放置在四维混匀仪上，室温混匀30min。
9.根据权利要求5或8所述的方法，其特征在于，所述步骤4是用洗脱试剂II及洗脱试剂III对捕获后的文库进行洗脱。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于天津莱贝生物科技有限公司，未经天津莱贝生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202011299951.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
