[发明专利]基于UHPLC-Q-TOF/MS识别消痰通腑方化学成分的分析方法

说明书

本发明提供了一种基于UHPLC‑Q‑TOF/MS识别消痰通腑方化学成分的分析方法，包括：A组分提取：醇提取或水提得免煎剂提取液；B样品前处理：提取液3000r/min离心，上层溶液15000r/min离心，取适量上清液于棕色进样瓶中；C分析：色谱条件：选用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，柱温30℃，流速0.3mL/min，进样量1μL，检测波长254nm，流动相：含0.1％甲酸的水溶液作为A相，乙腈作为B相，进行梯度洗脱；质谱条件：ESI离子源，分别在正、负离子模式下采集数据；数据采集范围m/z 100～1700，离子源温度350℃，正离子模式下毛细管电压3.5kV、负离子模式下4.0kV，雾化气压力45Psi，干燥气流速11L/min，鞘气流速11L/min，鞘气温度350℃，碎片电压140V。

技术领域

本发明涉及成分分析技术领域，涉及中药配方化学成分的分析方法，尤其涉及基于 UHPLC-Q-TOF/MS识别消痰通腑方化学成分的分析方法。

背景技术

用于胃肠癌前病变患者的消痰通腑方，能够延缓胃肠癌前患者向肿瘤的进展，同时对 脓毒症等危重症患者的胃肠功能恢复有较好疗效(参见参考文献1-9)。该方剂由法半夏、 生大黄、制大黄、制南星、重楼和黄连等6种中药配伍组成，法半夏、制大黄为主药，旨于消痰止呕、泄下通俯之意。半夏乃燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之良药，法半夏为半 夏的炮制品，倍其化痰之力；制大黄经生品炒制后，泻下力缓，能通达肠腑而推陈制新， 又不伤正气，二者合用既燥湿化痰，又缓消积滞，达消痰通腑之功。黄连既能泻脾胃之火， 又可燥痰饮之湿。

目前对该方剂的研究集中在药理功效方面，尚无对该方剂化学成分、有效成分的相关 研究报道。寻找中药复方的临床效应基础，是长期困扰中医人临床研究的难点。中药药效 的发挥是多种化学成分协同作用的结果，明确中药中固有的化学成分及其含量(体外成分 群)是药效物质研究的基础。

《中国药典》2020版仅仅只对消痰通腑方所含6种药材中的大黄、制南星、重楼和黄连的相关化合物进行含量检测，从而对药材进行质量鉴定：大黄为芦荟大黄素、大黄酸、 大黄素、大黄酚和大黄素甲醚；制南星为芹菜素，重楼为重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼 皂苷VI和重楼皂苷VII；黄连为小檗碱、表小檗碱和黄连碱。

中药方剂在中医临床实践中形成了以汤剂为主的口服给药方式，药材煎煮制备获得复 方时是否会导致化学成分的改变，消痰通腑方免煎剂是否也需要对上述化合物进行检测来 确定方剂的质量均未知。再有，中药方剂具有多成分、多靶点、多途径、整合调节的作用 特点，因此，有必要对消痰通腑方所含所有药材的化学成分群进行分析，初步确定其化学 成分特征，为其质量控制提供数据参考。

近年来，UHPLC-Q-TOF/MS技术以其高灵敏度、准确性和高分离速率的优点，并结合其既能对化合物进行质谱高分辨分析又能对目标离子进行二级质谱碎片分析的特点，已广泛用于中药复方复杂体系化合物的快速分析鉴定，本发明也基于该项技术进行。

发明内容

本发明的目的在于基于UHPLC-Q-TOF/MS技术开展中药复方体外成分的鉴别、定量分析，明确消痰通腑方免煎剂的化学成分，为下一步阐明药效物质筛选提供科学依据。

本发明提供的基于UHPLC-Q-TOF/MS识别消痰通腑方化学成分的分析方法中，所述消痰通腑方由法半夏、生大黄、制大黄、制南星、重楼和黄连配伍组成，分析方法包括如 下步骤：

A、组分提取

采用醇提取或水提的方式获得免煎剂提取液。

醇提取的方式如下：精密称定免煎剂摇匀、密塞，加入体积为免煎剂质量100倍的70％甲醇，称定质量后超声提取30min，放至室温，再次称定质量，并用甲醇补足减失的 质量；

水提的方式如下：精密称定免煎剂，用100C开水搅拌5min，超声30min得水提液。