[发明专利]结核分枝杆菌的分子分型方法

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌的分型方法在制备用于对结核分枝杆菌进行分型的试剂盒中的用途，所述方法包括：

提取标本中结核分枝杆菌的核酸；

确定结核分枝杆菌的核酸中VNTR位点的拷贝数；以及

根据所确定的VNTR位点的拷贝数对标本中结核分枝杆菌进行分型；

其中通过基于9个VNTR位点的多重PCR分组检测方案确定各VNTR位点的拷贝数，所述分组检测方案为：MIRU26-Mtub04为第一组；Mtub21-VNTR2372为第二组；QUB11b-QUB26为第三组；MIRU31-MIRU40-QUB18为第四组。

2.根据权利要求1所述的用途，其中在确定结核分枝杆菌的核酸中VNTR位点的拷贝数之前对标本进行预处理，以确定和/或调整标本中结核分枝杆菌的浓度。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其中通过PCR确定结核分枝杆菌的核酸中VNTR位点的拷贝数。

4.根据权利要求3所述的用途，其中使用琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳检测PCR产物。

5.根据权利要求4所述的用途，其中在Qsep100/400全自动核酸蛋白分析系统中，针对9个VNTR位点的DNA分子量标志物在100-2000bp范围内设置指示带的数量，在450bp以下每隔1/2-1个重复单元设置一条指示带，在450-1000bp范围内每隔1-2个重复单元设置一条指示带，在1000-2000bp每隔3-5个或4-6个或3-8个或3个或4个或5个或6个或7个或8个重复单元设置一条指示带。

6.根据权利要求1或2所述的用途，其中进一步包括确定结核分枝杆菌的核酸中另外三个VNTR位点的拷贝数，所述三个VNTR位点选自VNTR3820、VNTR4120和QUB3232。

7.根据权利要求6所述的用途，其中在Qsep100/400全自动核酸蛋白分析系统中，针对另外三个VNTR位点的DNA分子量标志物在300-2000bp范围内设置指示带的数量，在1000bp以下每隔1个重复单元的长度设置一条指示带，在1000-2000bp间隔2-4个或2-6个或2个或3个或4个或5个或6个重复单元设置一条指示带。

8.根据权利要求1或2所述的用途，其中所使用的引物包括：

9.根据权利要求8所述的用途，其中所使用的引物还包括：

10.根据权利要求1或2所述的用途，其中预处理所使用的引物包括：

所使用的探针包括：

MIRU-gyrB-P FAM-5′-TCTGCACGGCGTCGGCGTGTCGGT-BHQ1

IC-P HEX-5′-CGCTGCCGATATAGGTCACAGC-BHQ1。

11.结核分枝杆菌分型引物组，其包括以下引物：

12.根据权利要求11所述的引物组，其还包括：

13.根据权利要求11或12所述的引物组在制备用于对结核分枝杆菌进行分型的试剂盒中的用途。

14.用于对结核分枝杆菌进行分型的试剂盒，其包括根据权利要求11或12所述的引物组。

15.根据权利要求14所述的试剂盒，其进一步包括：

MIRU-gyrB-P FAM-5′-TCTGCACGGCGTCGGCGTGTCGGT-BHQ1

IC-P HEX-5′-CGCTGCCGATATAGGTCACAGC-BHQ1。

16.根据权利要求14或15所述的试剂盒，其还包括Taq酶、PCR缓冲液和DNA分子量标志物。