[发明专利]一种融合蛋白及其应用有效
| 申请号： | 202011308076.2 | 申请日： | 2020-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN113717256B | 公开（公告）日： | 2023-10-03 |
| 发明（设计）人： | 姚红杰;李尧益;王新秀;黄赛南 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院;生物岛实验室 |
| 主分类号： | C07K14/00 | 分类号： | C07K14/00;C12N9/22;C12N9/12;C40B50/06;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人： | 万志香;顾书玲 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 融合 蛋白 及其 应用 | ||
1.一种融合蛋白，其特征在于，包括由第一功能区和第二功能区构成的二聚体，其中⑴第一功能区包括R-loop特异结合蛋白HBD；
⑵第二功能区包括MNase核酸酶或Tn5转座酶；
⑶连接第一功能区和第二功能区的的连接结构。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的HBD为R-loop特异识别蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或为在SEQ ID NO.1所示序列基础上经取代、缺失或增加一个或多个氨基酸，且具有相同功能的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的MNase核酸酶为野生型MNase截短体，优选为氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，或为在SEQ ID NO.2所示序列基础上经取代、缺失或增加一个或多个氨基酸，且具有相同功能的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Tn5转座酶为野生型Tn5转座酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，或为在SEQ ID NO.3所示序列基础上经取代、缺失或增加一个或多个氨基酸，且具有相同功能的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的连接结构的氨基酸序列如DDDKEF或DDDKEFGGGGS所示。
6.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白上连接有蛋白纯化标签，所述的蛋白纯化标签为His标签、GST标签、MBP标签、或SUMO标签。
7.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的第二功能区连接在第一功能区的氨基酸功能区的N端。
8.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的单体为HBD-MNase或HBD-Tn5，所述融合蛋白HBD-MNase的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，或为在SEQ ID NO.5所示序列基础上经取代、缺失或增加一个或多个氨基酸，且具有相同功能的氨基酸序列；所述融合蛋白HBD-Tn5的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，或为在SEQ ID NO.6所示序列基础上经取代、缺失或增加一个或多个氨基酸，且具有相同功能的氨基酸序列。
9.权利要求1-8任一项所述的融合蛋白在制备生物学样本的R-loop高通量测序文库中的应用。
10.权利要求1-8任一项所述的融合蛋白在原位活性R-loop检测中的应用。
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