[发明专利]一种肿瘤细胞三维模型及其活力检测方法

说明书

一种肿瘤细胞三维模型及其活力检测方法，涉及建立细胞模型及其检测方法，本发明通过预处理的96孔板，每孔加入1%琼脂糖溶液冷却后备用。将HT29细胞以1.975×10⁴、2.96×10⁴、4.444×10⁴、6.667×10⁴、1×10⁵个·mL^‑1每孔100μL接种于预处理的96孔板，通过倒置的显微镜观察细胞球形态并计算细胞球体积，完成细胞的三维模型的制备。并通过利用酸性磷酸酶法（APH）和噻唑蓝法（MTT）测定细胞活力，比较两种方法的优劣。采用96孔平底培养板结合琼脂糖凝胶培养法建立人结肠癌HT29细胞三维培养模型，并结合APH法进行细胞活力检测，此方法简单、便捷、准确、经济，可用于进一步的药物活性筛选及机制研究。

技术领域

本发明涉及建立细胞三维模型及其检测方法，特别是涉及一种肿瘤细胞三维模型及其活力检测方法。

背景技术

近年来，细胞培养在生物学技术方面扮演着重要的角色，细胞实验己经广泛应用于生命科学研究。人体内组织为三维（ Three - dimensional，3D）结构，然而目前的细胞实验大多采用二维培养。二维培养的细胞呈单层分布，其增殖速度快于体内细胞，对于抗癌药物和抗病毒药物高度敏感。三维条件下培养的细胞呈三维立体分布，细胞张力低，以多种方式迁移，对于药物的敏感性低，这类似于细胞在体内的生物学功能和特征。

与二维细胞培养相比，三维细胞培养能在接近生理相关的环境下模拟体内细胞的形态特征、细胞行为、细胞增殖、细胞迁移等。

三维细胞培养具有灵活性、成本效益高以及高通量的特点。

三维培养模型可允许营养物质以及代谢产物在细胞内外进行交换，还能够监测和控制培养微环境中的理化条件，如温度、pH值、氧气浓度等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肿瘤细胞三维模型及其活力检测方法，本发明基于普通96孔板，采用琼脂糖凝胶三维培养方法及一种肿瘤细胞活力检测，确立了一种简便、快速、可靠的三维细胞活力检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种肿瘤细胞三维模型，所述肿瘤细胞三维模型包括用琼脂糖凝胶培养法培养HT29细胞培养三维细胞球，显微镜下考察细胞球形态；通过测量细胞球提及，绘制细胞接种数对细胞球体积曲线；使用酸性酶APH、MTT法、测定相应的吸光度值，绘制细胞接种数与吸光度值曲线；通过吉非替尼和紫杉醇处理三维细胞球；

建立细胞三维模型具体步骤：

1．用于肿瘤细胞三维培养的琼脂糖凝胶的配置

1） 精密称量琼脂糖，放入锥形瓶中，加入蒸馏水，制成 1 % 的琼脂糖悬浮液；

2）加塞密封，放入高压灭菌锅内高温灭菌；

3） 灭菌完成后，即成琼脂糖溶液，冷却后成为凝胶保存在4 ℃冰箱备用；

4） 将琼脂糖凝胶加热至95 ℃左右，使其充分融化，琼脂糖溶液设置三个铺设量:35、45、55μL每孔，趁热将琼脂糖溶液加入到96孔板中，放入37 ℃，5 % CO2培养箱备用；

2.琼脂糖凝胶三维细胞培养

1）将培养皿中培养到细胞对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化液消化下来，制成不同浓度的细胞悬液；

2）以1.975×104、 2.96×104、 4.444×104、 6.667×104、 1×105 个·mL- 1每孔 100 μL 接种于预处理的 96 孔板，每孔 100 μL 细胞悬液量接种于制备的琼脂糖培养板底部凹面，1000 r·min- 1 离心 1 min 后放入培养箱，进行后续相关检测；

3）细胞球体积