[发明专利]基于柠檬形克勒克酵母和间型假丝酵母联合菌剂的制备方法及其应用

说明书

本发明属于水果采后生物防治技术领域，具体涉及基于柠檬形克勒克酵母和间型假丝酵母联合菌剂的制备方法及其应用；本发明先将柠檬形克勒克酵母、间型假丝酵母C17培养后的种子液加入NYDB培养基，按照3:1：100的体积比混合，经离心得到的菌体，加入保护剂后再进行冷冻干燥，得到联合菌剂；联合菌剂可用于防治黄桃采后炭疽病，具体步骤为：使用时用无菌水悬浮并调整酵母浓度至1×10⁸cells/mL，将菌液均匀喷洒于黄桃表面或将黄桃在菌液中浸泡后取出，自然晾干；联合菌剂处理后的桃果实炭疽病发病率和自然腐烂率显著降低，并延缓桃果实可溶性固形物，总酸及Vc含量的降低，抑制果实失重率和果皮细胞膜透性的增加。

技术领域

本发明属于水果采后生物防治技术领域，具体涉及基于柠檬形克勒克酵母和间型假丝酵母联合菌剂的制备方法及其应用。

背景技术

桃(Prunus persica L.)属蔷薇科(Rosaceae)桃亚属(Amygdalus)果树，其果实有着丰富的营养价值。黄桃因具有果大丰产、果皮与果肉均为黄色、含糖量高、风味诱人等特征，深受国内外消费者喜爱。黄桃属于呼吸跃变型水果，在采收及贮运过程中极易受到环境、自身、微生物及采收成熟度等因素的影响，使果实的品质和耐贮藏性下降。研究表明，病原微生物的侵染是造成桃腐烂的主要原因，其中炭疽病是导致黄桃采后腐烂的主要病害之一，该病害是由炭疽菌引起。桃患病后，初期呈淡褐色水浸状病斑，渐扩展，红褐色，凹陷，呈同心环状皱缩，并融合成不规则状大斑。

一直以来，控制黄桃采后病害主要依靠物理方法和化学的方法。常见的物理方法有热处理、低温贮藏、压力调节、气调、紫外照射、超声等。虽然物理方法在采后病害的防治上有着不错的效果，可以有效的减少果实采后的腐烂，且对环境没有危害；但是由于其操作繁琐，技术要求高，设备资金投入高而不能广泛应用到生产实践中。常见化学方法是使用化学杀菌剂，因其杀菌谱广，见效快，操作简便和价格低廉等特点而被广泛应用。生产上用来防治桃腐烂的杀菌剂主要有以下几类：β微管抑制剂(BZIs)，呼吸抑制剂(QoIs)，甾醇脱甲基化酶抑制剂(DMIs)和二甲酰亚胺类杀菌剂(DAFs)等，但化学药剂过度使用会造成环境污染，危害人畜健康，并诱导病原菌产生抗药性。近些年，随着经济发展和消费水平的提高，人们对食品安全和环境保护的意识日益加强，化学杀菌剂的使用限制日趋严格。因此，探寻新的能够代替化学杀菌剂的安全、高效的防治方法已迫在眉睫。

生物防治是利用对人体无害的拮抗微生物对水果采后病害进行控制的方法，具有高效安全，对环境友好等特点，是解决农业可持续发展的有效途径，目前有的生防治剂已经在生产中得到应用。近年来，已研究的可作为果蔬采后病害生防拮抗菌的微生物有细菌，霉菌和酵母。其中拮抗酵母菌因具有营养要求简单、易定植、繁殖快、抗逆性强等诸多优点而成为主要研究对象。因此，以有效的生防微生物取代化学杀菌剂，用于黄桃采后病害的防治拥有巨大的应用前景。

发明内容

本发明针对目前农业生产中黄桃采后真菌病害防治难度大，成本高，化学农残高等问题，所使用的两株对桃炭疽病具有显著防治作用的菌株分别为柠檬形克勒克酵母(kloeckera apiculata)和间型假丝酵母(Candida intermedia)C17；其中柠檬形克勒克酵母(kloeckera apiculata)购买于中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号:ACCC20021；间型假丝酵母(Candida intermedia)C17从江苏省镇江市有机桃园采取枝叶样品采集筛选，保藏号为CCTCC NO:M 2018584，保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2018年9月3日。

并提供了基于柠檬形克勒克酵母和间型假丝酵母联合菌剂的制备方法，可以有效控制黄桃采后炭疽病的发生，减少采后病害造成的损失，具有潜在的应用价值。

本发明采用的技术方案

本发明首先提供了两株防治黄桃采后炭疽病的酵母菌株柠檬形克勒克酵母(kloeckera apiculata)和间型假丝酵母(Candida intermedia)C17；