[发明专利]一种覆盆子酮的工业化发酵生产方法

权利要求书

1.一种覆盆子酮的工业化发酵生产方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)以天然对香豆酸为原料，在放线菌Actinomycetes sp.OMK-74代谢下生成对羟基苯甲醛；

(2)以步骤(1)所得的对羟基苯甲醛与丙酮为原料，在芽胞杆菌Bacillus sp.OMK-75代谢下生成4-羟基苄叉丙酮；

(3)以步骤(2)所得的4-羟基苄叉丙酮为原料，在酵母菌Saccharomyces sp.OMK-76代谢下还原生成所述覆盆子酮；

放线菌Actinomycetes sp.OMK-74于2020年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020584；芽胞杆菌Bacillus sp.OMK-75于2020年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020585；酵母菌Saccharomycessp.OMK-76于2020年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2020586。

2.如权利要求1所述的工业化发酵生产方法，其特征在于：所述步骤(1)包括：

A、取甘油冷藏的放线菌Actinomycetes sp.OMK-74进行平板划线，所得平板置于36-37℃培养至克隆子饱满；

B、从上述克隆子中挑取单克隆子接种于第一种子培养基中，于36-37℃、180-220rpm摇床培养或280-320rpm通风搅拌培养20-25h，获得第一种子培养液；

C、将上述第一种子培养液以8-12％的接种量接种于第一发酵培养基中，于36-37℃、pH＝7.0-7.5的条件下发酵培养12-16h至分光光度计测定OD₆₀₀不再增加时，一次性或分批流加对香豆酸至终浓度为48-52g/L，再继续培养至底物反应完全或不再继续反应时，然后经纯化，获得所述对羟基苯甲醛。

3.如权利要求2所述的工业化发酵生产方法，其特征在于：所述第一种子培养基的配方如下表所示：

其中溶剂为水。

4.如权利要求2所述的工业化发酵生产方法，其特征在于：所述第一发酵培养基的配方如下表所示：

其中溶剂为水。

5.如权利要求1所述的工业化发酵生产方法，其特征在于：所述步骤(2)包括：

A、取甘油冷藏的芽胞杆菌Bacillus sp.OMK-75进行平板划线，所得平板置于29-30℃培养至克隆子饱满；

B、从上述克隆子中挑取单克隆子接种于第二种子培养基中，于29-30℃、180-220rpm摇床培养或380-420rpm通风搅拌培养20-25h，获得第二种子培养液；

C、将上述第二种子培养液以8-12％的接种量接种于第二发酵培养基中，于34-35℃、pH＝6.5-7.0的条件下发酵培养8-12h至分光光度计测定OD₆₀₀不再增加时，一次性添加对羟基苯甲醛和丙酮分别至终浓度为38-42g/L和100-150g/L，再继续培养至底物反应完全或不再继续反应时，然后经纯化，获得所述对羟基苄叉丙酮。

6.如权利要求5所述的工业化发酵生产方法，其特征在于：所述第二种子培养基的配方如下表所示：

其中溶剂为水。

7.如权利要求5所述的工业化发酵生产方法，其特征在于：所述第二发酵培养基的配方如下表所示：

其中溶剂为水。