[发明专利]一种扩张型心肌病分子标志物

说明书

本发明公开了一种扩张型心肌病分子标志物，其为CHMP4C基因SEQ ID NO:1的突变体SEQ ID NO:3、或者突变体SEQ ID NO:3编码的多肽SEQ ID NO:4。该分子标志物用于制备诊断自噬功能紊乱导致的扩张型心肌病的试剂盒。

技术领域

本发明属于医学领域，具体涉及一种扩张型心肌病分子标志物及其在制备用于扩张型心肌病诊断的试剂盒中的应用。

背景技术

扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)是一种原因未明的原发性心肌疾病，它的特征为心室扩大，并伴有心室收缩功能异常，早期以心律失常多见。病情呈进行性加重，死亡可发生于疾病的任何阶段。通过临床研究发现，人群的发病率在大约在1/2500，基因突变是DCM患者的主要病因，通过基因筛查发现，大约35％的患者主要是由于基因突变导致的，涉及心肌细胞骨架基因、细胞核膜基因、离子通道基因等等，但是还有大部分患者没有找到明确的致病基因，说明潜在的扩张型心肌病相关的新基因有待去发现。

扩张型心肌病患者的病程具有明显的异质性，从无症状到心率失常，最为严重的为心力衰竭、猝死，同时DCM与其他心肌病例如肥厚型心肌病、右室心肌病、离子通道疾病在临床表现及基因突变上都有交集。从2015年开始，我们对临床诊断为心肌病的患者行致病基因筛查。共入组411个家系，每个家系包括患者及其亲属，我们首先对心肌病先证者行全外显子测序，如果有必要时对亲属也行全外显子测序，然后在找到致病基因突变的先证者的家系中行sanger验证。在中国发明专利CN201710732660.2中，我们运用二代测序技术，通过外显子捕获富集全基因组DNA编码序列，发现了扩张型心肌病相关的致病基因及致病突变，包括Chmp4c基因c.488AG突变、LMNA基因c.961CT突变和MYH7基因c.2458GC突变。

基于这些发现，继续利用全外显子组测序筛查致病基因，对于没有找到明确致病基因的家系，我们选择家系中表型非常明确的其他成员进行全外显子测序分析，家系整体进行共分离验证，寻找可能的致病基因。通过全外测序发现4个扩张型心肌病(DCM)患者家系中携带CHMP4C突变，在家系1中发现了一个罕见的CHMP4C变异体(c.488AG，p.E163G)，表明它可能与此家族中的DCM相关；进而在另3个家族中发现了一个新突变：CHMP4C错义变体(c.C611T，p.S204L，gnomAD，21/282456和0.00007435)，后续在动物模型上对CHMP4C相关的功能做进一步的验证。

发明内容

通过构建小鼠模型，发现杂合CHMP4C小鼠表现出心律增加，左心室收缩末期直径增加和心脏重量减少。在斑马鱼实验中，CHMP4C过表达突变体导致心脏畸形，心包水肿和心律加快，提示CHMP4C在心脏发育和心血管功能中起关键作用。进一步在HEK293细胞中发现CHMP4C变异体会导致异常的自噬并激活HEK293T细胞的凋亡，提示心脏中CHMP4C突变的潜在致病机制，即通过自噬-凋亡信号通路诱导扩张型心肌病的发生。由此得出结论：CHMP4C基因突变导致心肌细胞的自噬功能紊乱，继而激活凋亡信号通路，导致心肌细胞功能异常，表现为心脏功能异常。上述研究构成了本发明的基础。具体而言，本发明包括如下技术方案。

一种扩张型心肌病分子标志物，其为CHMP4C基因SEQ ID NO:1的突变体SEQ IDNO:3；或者是CHMP4C基因突变体SEQ ID NO:3编码的多肽SEQ ID NO:4。

其中，SEQ ID NO:3是CHMP4C基因SEQ ID NO:1的(c.A488G，c.C611T)突变体。相对应地，多肽SEQ ID NO:4是SEQ ID NO:1编码的野生型多肽SEQ ID NO:2的(p.E163G，p.S204L)突变体。