[发明专利]重组鼠Tet3蛋白原核表达及其稳定性研究

权利要求书

1.鼠Tet3蛋白克隆至原核表达载体pET28a(+)，其特征在于，包括下述步骤：

（1）人工合成鼠Tet3基因，Tet3和pET28a(+)经BamHl和Xhol 双酶切后连接，构建重组质粒pET28a-Tet3；

（2）然后用CaCl2法将重组质粒分别转化到原核表达宿主Rosetta(DE3)和C41(DE3)中，构建工程菌。

2.如权利要求书1所述的鼠Tet3蛋白克隆至原核表达载体pET28a(+)过程，其特征在于，所述步骤（1）中，查阅NCBI数据库中鼠Tet3基因转录本，人工合成鼠Tet3基因，然后将pET28a(+)和Tet3基因经BamHl、Xhol双酶切，通过连接转化构建pET28a-Tet3。

3.如权利要求书1所述的鼠Tet3蛋白克隆至原核表达载体pET28a(+)过程，其特征在于，所述步骤（2）中，将重组质粒分别转化到原核表达宿主Rosetta(DE3)和C41(DE3)中，目的是为了筛选目的基因最适合的表达宿主。

4.重组鼠Tet3蛋白表达条件的优化，其特征在于构建好的工程菌用IPTG诱导表达，并从诱导温度和IPTG浓度两个方面对目标蛋白表达进行优化。

5.探讨温度对重组鼠Tet3蛋白稳定性的影响，其特征在于，在本发明中选取了三个温度条件即常温、4℃和37℃，分别保存60天，挑取其中的24个样本电泳检测来分析Tet3蛋白在液体保存状态下的稳定性。