[发明专利]防御素DLP4在治疗仔猪渗出性皮炎中的应用

说明书

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及防御素DLP4在治疗仔猪渗出性皮炎中的应用。本发明中发现防御素DLP4对多重耐药猪葡萄球菌具有高效的体外杀菌活性，且表现出迅速高效、不易反弹的杀菌特点。针对感染了猪葡萄球菌的仔猪渗出性皮炎，防御素DLP4能够显著缓解皮炎症状，促进皮肤恢复，调节炎性因子，降低脏器荷菌量，保护脏器免受器质性损伤，从而达到治疗渗出性皮炎的目的。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及防御素DLP4的新用途，进一步地，涉及防御素DLP4在治疗仔猪渗出性皮炎中的应用。

背景技术

20世纪80年代，Steiner发现了天蚕防御素，自此抗菌肽进入人们的视野，因其高效的抑菌效果，同时对病毒、肿瘤、真菌和寄生虫也表现出高效的抑制效果，其主要来自于真菌、细菌、古细菌、原核生物、植物和动物。抗菌肽根据其二级结构的不同分为α螺旋型抗菌肽、β折叠型抗菌肽、α螺旋-β折叠型抗菌肽和非α螺旋-β折叠型抗菌肽。抗菌肽作为生物先天免疫的重要组成部分，虽结构各异，但仍存在一些共性：抗菌肽为阳离子两亲性小分子多肽，富含赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸，一般由20-100个氨基酸组成，具有高效的抑菌活性，同时能够增强宿主免疫调控功能，对于动物抗感染具有重要作用。

昆虫抗菌肽是昆虫得以生存发展的基础，其与脊椎动物不同，没有后天免疫系统，主要依靠其先天免疫体系来抵御外界微生物病原体的入侵，抗菌肽为其先天免疫系统的重要组成部分。防御素是昆虫抗菌肽的一种，主要分离自双翅目、毛翅目、半翅目、和膜翅目。昆虫防御素多为小分子阳离子多肽，一般由有34～46个氨基酸组成，分子内带有有3～4对半胱氨酸组成的二硫键。昆虫防御素是昆虫经细菌等诱导后在血淋巴或脂肪体中形成，多以前体形式形成，在体内经酶切作用后，成熟肽经血淋巴释放进入昆虫体内的各部分发挥作用。该防御素具有高效的抗细菌与真菌活性，尤其对革兰氏阳性菌的杀菌活性表现异常突出，其MIC一般低于μM水平，研究表明，昆虫防御素的抗细菌活性与离子强度相关，在低离子强度条件下，抗菌活性较强，离子强度升高，防御素的抑菌活性相应降低，其抗细菌作用机制复杂，可通过对细胞膜作用，破坏细胞膜的通透性，造成渗透压失衡，引起细菌死亡。而昆虫防御素的抗真菌作用多是通过抑制孢子萌发或菌丝穿孔来实现的。除此之外，昆虫防御素表现出较好的稳定性和水溶性，在水平在远高于生理浓度的条件下，仍无溶血性，不损伤或破坏正常细胞。

DLP1-4为分离自黑水虻幼虫(Hermetia illucens)的四种抗菌肽，其成熟肽由相同数量的氨基酸组成，且大部分氨基酸序列相同，其中DLP4与DLP1-3相比，开放读码框氨基酸序列存在显著不同，净电荷和疏水性也稍有不同，表现出较突出的抑菌活性。DLP4是由40个氨基酸组成，分子量为4265Da的小分子多肽，带有六个正电荷，序列比对发现DLP4与昆虫防御素sapecin14和lucifensin的序列相似性为60％-67.5％，与Phlebotomus duboscqi防御素的序列相似性高达75％。根据sapecin14二级结构，利用生物信息模拟对其结构进行分析，结果显示其为典型的CSαβ结构，具体表现为其是3对半胱氨酸组成二硫键，1个N端α-螺旋，2个C端的两个反向平行的β-折叠，该结构由3对二硫键来稳定α-螺旋、β-折叠和Loop区(Purification and characterization of a novel antibacterial peptide fromblack soldier fly(Hermetia illucens)larvae.DevelopmentalComparativeImmunology2015,52(1):98-106；Li Z,etc.:Antibacterial and immunomodulatoryactivities of insect defensins-DLP2 and DLP4 against multidrug-resistantStaphylococcus aureus.Scientific Reports 2017,7(1):12124)。