[发明专利]体外检测SelS基因启动子突变的试剂及其在制备冠心病筛查试剂盒的应用

说明书

本发明涉及冠心病易感基因检测试剂或试剂盒技术领域，是一种体外检测SelS基因启动子突变的试剂及其在制备冠心病筛查试剂盒的应用，SelS基因启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，SelS基因启动子突变时，其核苷酸序列表中第84位至第89位缺失。本发明公开了一种新的与冠心病易感性密切相关的SelS基因启动子突变位点，并基于该启动子突变位点开发用于冠心病筛查或预测的试剂盒，该发明所述SelS基因启动子突变位点的应用，可以更加精准的在分子水平上实现对冠心病的早期筛查，针对性强，灵敏度高。

技术领域

本发明涉及冠心病易感基因检测试剂或试剂盒技术领域，是一种体外检测SelS基因启动子突变的试剂及其在制备冠心病筛查试剂盒的应用。

背景技术

冠心病(Coronary Artery Disease，CAD)是指冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变，引起血管腔狭窄、阻塞或冠状动脉血管功能性改变即冠状动脉痉挛，造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病，又称冠状动脉粥样硬化性心脏病。尽管医疗技术的飞速发展，使得CAD危险因素防控体系不断完善，但流行病学研究推测，CAD的发病率和死亡率仍将在未来20年内呈现递增趋势。CAD是一种复杂疾病，对CAD病因学、早期诊断、治疗及预防等方面的研究是目前的热点问题。研究显示，CAD具有重要的遗传基础，并被认为与环境因素等效，但从遗传学角度对其开展疾病早期筛查与诊断远不够理想。有鉴于此，目前亟需探寻和发掘特异、准确、敏感的CAD易感基因，以用于冠心病的防治与诊疗。

SelS基因多态性与糖尿病、动脉粥样硬化、血脂水平、促炎和抗炎细胞因子、先兆子痫、类风湿性关节炎及癌症的发生、发展可能有关。尽管SelS是导致CAD风险的候选基因已经十分明确，但在不同人群中关于SelS基因多态性与CAD之间的关联目前尚未明了。Alanne等在芬兰的两项独立前瞻性研究中发现SelS基因多态性对冠心病发病风险的影响，提示SelS基因多态性与冠心病发病显著相关，尤其是在女性群体中。此外，他们还观察到，在欧美2型糖尿病患者中，SelS的基因多态性与亚临床冠心病的风险相关。Li等在中国汉族人群中发现SelS基因SNP rs4965814与缺血性脑卒中密切相关。课题组前期研究也发现在中国人群中，SelS与2型糖尿病及血浆甘油三酸酯水平升高相关。由此可见，SelS在炎症和糖脂代谢中发挥重要作用，可能与CAD的发生发展密切相关，但具体位点和片段仍未精确定位，致使后期开发以相关基因位点或片段为干预靶标的CAD防治药物存在一定困难。

启动子作为相关转录因子并结合RNA聚合酶的靶序列，可作为cis元件调控和调控转录起始点，对转录起始点的表达时间和程度具有重要的调控作用。基因启动子区域序列突变可影响RNA聚合酶和各种转录因子与顺式作用元件和反式作用元件的结合，从而最终影响基因转录水平的变化。

发明内容

本发明提供了一种体外检测SelS基因启动子突变的试剂及其在制备冠心病筛查试剂盒的应用，克服了上述现有技术之不足，本发明通过对冠心病人群筛查发现了SelS基因启动子新的突变位点，人群大样本成功验证后借助双荧光素酶报告基因、电泳迁移(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)等技术对其进行了功能分析研究，并基于此开发了SelS基因启动子突变检测试剂盒，为CAD遗传易感性、早期预防及早期诊断提供科学依据。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种体外检测SelS基因启动子突变的试剂，SelS基因启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，SelS基因启动子突变时，其核苷酸序列表中第84位至第89位缺失，试剂包括引物及探针，引物的核苷酸序列如下：

上游引物(核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示)：GAAATTCGGTAAGAAATCCGTAAC；

下游引物(核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示)：CGCAACGACTCACCCGTGG；

所述探针的核苷酸序列如下：