[发明专利]来自海洋的假交替单胞菌HL9及其产磷脂酶B的方法

说明书

本发明是一种来自海洋的假交替单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）HL9，其菌种保藏号为CGMCC NO.20408。本发明还公开了利用假交替单胞菌HL9产磷脂酶B的方法，将假交替单胞菌HL9接种到种子培养基中，转数180rpm，装液量20%，25℃培养9h得到种子液；种子液接种于产酶培养基中，180rpm，25℃培养48h，8000rpm离心30min，取上清液即得磷脂酶B粗酶。本发明菌株HL9革兰氏阴性杆菌，无鞭毛，无荚膜，在25℃时菌株HL9生长的最好，在pH为8时生长的最好。菌株HL9产酶方法简单，所产的酶适合作用pH为7.5。在pH7‑8时保持较高活性。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一种分离自中国黄海深49米处海泥的海洋假交替单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）HL9；本发明还公开了交替单胞菌HL9株产磷脂酶B的方法与应用。

背景技术

磷脂酶是指能够特异性水解底物磷脂不同酯键的一类水解酶的统称，可广泛的应用于医药，油脂精炼，磷脂改性，食品加工等。

磷脂酶根据作用底物位置的不同可以分为磷脂酶A1，磷脂酶A2，磷脂酶B，磷脂酶C，磷脂酶D。其中磷脂酶B能够水解 Sn-1 及 Sn-2 的酰基，释放出溶血磷脂和两个脂肪酸。与此同时还具有溶血磷脂酶和转酰基酶活性。研究发现，磷脂酶B在人体和动物的表皮细胞、细菌和真菌中大量存在。对于磷脂酶B的研究在国内有些已经开始朝着基因重组表达方向上研究，但依然有研究者在筛选新的产磷脂酶B菌株，以期筛选到性质更佳的磷脂酶B。目前，磷脂酶B已被应用在各个行业。在油脂精炼方面，磷脂酶B在脱胶上起着关键性作用，可以有效地将非水合磷脂转化为相应的水合形式，通过离心进行分离和去除。与传统脱胶方法相比，减少了化学药品的消耗，同时也产生很少的废物。在有价值的磷脂衍生物的生产方面也有着不可忽视的作用。 除此之外，磷脂酶B还被应用于医药与化妆品行业。

因此，研究可以产磷脂酶的新的菌株具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的问题是针对现有技术的不足，提供一种新的能产磷脂酶B的来自海洋的假交替单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）HL9。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供上述来自海洋的假交替单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）HL9的产磷脂酶B的方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。

本发明的特征包括假交替单胞菌（Pseudoalteromonassp.）HL9菌株本身以及利用该菌株生产磷脂酶B的方法。

本发明所涉及的菌株HL9是在中国黄海深49米处海泥中分离到的假交替单胞菌（Pseudoalteromonassp.）HL9，该菌株已于2020年7月20日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC NO.20408，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，联系电话：010-64807355。

本发明所述来自海洋的假交替单胞菌（Pseudoalteromonassp.）HL9产磷脂酶B的方法，其步骤如下：

（1）将假交替单胞菌HL9接种到种子培养基中，转数180rpm，装液量20%，25℃培养9h得到种子液；

（2）将种子液以2% 的接种量接种于产酶培养基中，180rpm，25℃培养48h，8000rpm离心30min，取上清液即得磷脂酶D粗酶；