[发明专利]一种10L规模化提取鸡血抗菌肽的方法

说明书

本发明公开了一种10L规模化提取鸡血抗菌肽的方法。该方法包括破碎：采用机械性破碎和超声波破碎相结合的方法破碎鸡血中的鸡血红细胞，获得鸡血液；酶解：采用木瓜蛋白酶酶解所述鸡血液获得酶解鸡血液，酶解时间为3‑9h，酶解温度为70℃；浸提：将所述酶解鸡血液快速冷却至4℃，加入等体积的5％冰醋酸水溶液静置，静置时间为12‑20h，离心取上清液，调节pH至6.0±0.5，获得鸡血中的抗菌物质，所述快速冷却为30～40min之内，所述酶解鸡血液的温度从70℃降至4℃。该方法将鸡血抗菌肽的提取量扩大10L，且不影响抗菌肽的活性，为鸡血抗菌肽的后续产业化及其在养猪生产中的应用提供了技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种10L规模化提取鸡血抗菌肽的方法。

背景技术

国家农业农村部194号公告中就已明确指出，“自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。”以全面维护动物源食品安全和公共卫生安全。在养猪产业，继高致病猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)，变异的猪伪狂犬病毒(PRV)及2018年发生的非洲猪瘟，病毒性疾病一次次摧毁着我国的养猪业，面对新病毒的进入和老病毒的变异，畜牧行业显得无能为力。抗病毒药物种类本身比较稀少，2005年12月，农业部禁止金刚烷胺、利巴韦林等一系列药物在动物上应用，导致目前基本没有成熟的抗病毒药物应用于畜牧业。在促生长药物添加剂禁用与抗病毒药物的匮乏两大背景下，开发和生产新型环保、安全、有效的抗菌、尤其是抗病毒类药物用于促进畜禽生长及疾病的预防和治疗的环境友好型新型饲料添加剂，已成为摆在畜牧兽医工作者面前的一项迫在眉睫的任务。在开发和寻找新的抗微生物类物质中，抗菌肽(AntimicrobialPeptides，AMPs)无论在人和动物应用方面作为一种新的抗菌物质从上世纪末以来，已成为全球研究的热点，抗菌肽具有抗生素和其他物质无法比拟的优点，尤其是内源性抗菌肽具有广谱、高效的抗微生物活性，来自机体自身，起源古老，经几百万年进化仍保留强大的抗微生物活性，故可能是解决上述问题的最佳选择。

我国每年要屠宰大约100多亿只鸡，产生约50万吨的鸡血，资源充足。鸡血中具有较强抗菌活性的多肽，因此开发研究一种从鸡血中提取、纯化抗菌肽的成熟方法，既能获得高活性的天然抗菌肽，又能对鸡血进行高价值利用。可谓一举两得。

发明内容

本发明目的为提供一种规模化(10L)提取鸡血抗菌肽的方法，为产业化生产奠定技术支撑。

本发明提供了一种鸡血中抗菌物质的提取方法，该提取方法包括：

破碎：采用机械性破碎和超声波破碎相结合的方法破碎鸡血中的鸡血红细胞，获得鸡血液；

酶解：采用木瓜蛋白酶酶解所述鸡血液获得酶解鸡血液，酶解时间为3-9h(如6h)，酶解温度为70℃；

浸提：将所述酶解鸡血液快速冷却至4℃，加入等体积的5％冰醋酸水溶液静置，静置时间为12-20h(如16h)，离心取上清液，调节pH至6.0±0.5(如6.0)，获得鸡血中的抗菌物质，所述快速冷却为30～40min(如30min)之内，所述酶解鸡血液的温度从70℃降至4℃。

该抗菌物质具体可为鸡血抗菌肽。抗菌性具体体现为抗如下细菌中的至少一种：大肠杆菌(如ATCC 25922)、绿脓杆菌(如ATCC 27853)、嗜水气单胞菌(Genbank IDSequence ID：gb|KJ156374.1|)。

可选地，步骤破碎所获得的鸡血液的体积≥5L。

可选地，所述机械性破碎和超声波破碎相结合的方法为采用机械性破碎将所述鸡血破碎为匀浆，加入蒸馏水，再使用超声波破碎所述鸡血中的鸡血红细胞。其中，蒸馏水的加入量可为所述匀浆的1/5体积。

可选地，在酶解步骤中，木瓜蛋白酶与所述鸡血液的配比为1-10mg/mL，所述木瓜蛋白酶的酶活为800000U/mg。该配比具体可为5mg/100mL。