[发明专利]流感病毒PB1蛋白抗原表位多肽及其用途

说明书

本发明涉及流感病毒PB1蛋白抗原表位多肽。本发明还涉及与上述抗原表位多肽特异性相互作用的针对流感病毒PB1蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有广谱性和高敏感性，其与H1‑H11等亚型的流感病毒均具有良好的反应性。本发明还涉及使用所述单克隆抗体制备的胶体金免疫层析试纸条。所述试纸条用20nm的胶体金颗粒对单克隆抗体7H11进行标记，将单克隆抗体1B7和羊抗鼠二抗分别喷涂于检测线T和质控线C，利用免疫层析技术原理实现了对广谱流感病毒的快速检测。

技术领域

本发明属于医学生物技术领域，尤其涉及流感病毒PB1蛋白抗原表位多肽以及其表位包含上述抗原表位多肽的广谱性单克隆抗体。另外地，本发明还涉及使用所述针对流感病毒PB1蛋白的单克隆抗体制备的胶体金免疫层析试纸条。

背景技术

流感病毒是一种能在禽类和多种动物中引起病毒性疾病的病原，并可能对动物和人类健康产生严重影响，其已成为公众日益关注的问题。由于流感病毒的快速变异和能够对动物和人类具有较高的致病性，因此一直以来均迫切需要高效的诊断方法，以便在无症状阶段检测出所有流感病毒亚型，从而实现终止流感病毒循环及其在鸟类、哺乳动物种群中的进化。

目前常用的流感病毒实验室诊断方法包括病毒的分离鉴定、血清学检测和分子生物学检测等方法，但是大多数方法都具有不足之处。例如，病毒的分离鉴定方法耗时长，一般需要3-4天；血凝与血凝抑制试验具有易于操作、结果快速准确等特点，但是每次仅能鉴定单一亚型；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法具有特异性高、敏感性强特点，但其具有影响因素多，需要专业人员操作以及成本较高等缺陷。单克隆抗体的出现和应用为流感病毒的诊断和防控带来了新的技术方法，单克隆抗体具有高度均一、单一生物活性、仅结合某一特定抗原表位、可以长期传代及无限繁殖等特性。现在大多数检测方法中均涉及单克隆抗体的应用，如ELISA法和胶体金免疫层析方法等。

胶体金试纸条检测技术成熟且操作简单，但由于流感病毒亚型众多、毒株复杂，而市场流行的检测方法仅是针对个别亚型的检测方式，难以对其他亚型的流感病毒进行检测而造成潜在的流感病毒存在，形成流感病毒周期性的流行。

因而，本发明旨在获得针对流感病毒PB1蛋白的高效、广谱性单克隆抗体，以及确定所述单克隆抗体特异性针对的新表位多肽，并使用上述单克隆抗体建立广谱性胶体金免疫层析试纸条，为流感病毒相关蛋白的结构和生物学功能的研究以及流感的防治和诊断方法提供新思路。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供了流感病毒PB1蛋白抗原表位多肽以及其表位包含上述抗原表位多肽的广谱性单克隆抗体。另外地，本发明还提供了使用所述针对流感病毒PB1蛋白的单克隆抗体制备的胶体金免疫层析试纸条。

为达到本发明的目的，本发明采用了如下技术方案：

在第一个方面中，本发明涉及一种流感病毒PB1蛋白抗原表位多肽，所述流感病毒PB1蛋白抗原表位多肽是氨基酸序列为SEQ ID NO:1或2所示的多肽。

进一步地，本发明还涉及一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码如上所述的抗原表位多肽。

更进一步地，所述多核苷酸的序列为SEQ ID NO:3或4。

在第二个方面中，本发明涉及针对流感病毒PB1蛋白的广谱性单克隆抗体，所述单克隆抗体是由杂交瘤7H11产生的单克隆抗体7H11，所述单克隆抗体的表位包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或者所述单克隆抗体是由杂交瘤1B7产生的单克隆抗体1B7，所述单克隆抗体的表位包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

进一步地，所述广谱性单克隆抗体对H1-H11亚型的一种或多种具有反应性。

更进一步地，单克隆抗体7H11为IgG2a亚型，和单克隆抗体1B7为IgG1亚型。