[发明专利]一种获得非洲芦苇组培苗的方法

说明书

本发明涉及了一种非洲芦苇诱导分化和生根一步成苗的方法，包括以下步骤：晴天时将采自室外的非洲芦苇枝条，露出小芽，剥净芽周外包叶，用带沾有75%乙醇棉球檫洗枝条表皮，然后将带芽茎段剪成2cm置于消毒瓶中置于超净工作台上；用75％乙醇浸泡30s，用无菌水漂洗3次后，用0.1％HgCl₂水溶液消毒10‑15min，再用无菌水洗涤4‑5次；将消毒后的芦苇茎段接种到诱导分化生根培养基上；经培养每段带芽茎段10天后，先生根接着抽芽，再培养20‑30天后可获得移栽组培苗。本发明方法能一步达成诱导分化和生根，达到快速增殖的目的。经过移栽炼苗后，该苗可以快速适应有土栽培，活力较强。本发明适用于该芦苇品种。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，通过对传统快繁组培体系的优化，本方法省去了诱导、分化、生根等较多次培养基的转换，节约了成本和时间，能快速提供一批长势均匀的种苗，为芦苇的生态、药用、园林、畜牧等领域的应用提供了多种可能和保证。

背景技术

芦苇是在植物界产能最高的挺水植物之一，作为湿地挺水植物群落的主要建群种，广泛生长在淡水湿地，甚至是盐度较高的滨海湿地和内陆盐碱湿地，并以其抗逆性强、适应性好、繁殖快等特点成为湿地生态恢复的工具种。芦苇根系分泌物有利于反硝化体系中氮素的去除和反硝化细菌数量的增加，对硝化强度具有促进作用，对反硝化强度具有抑制作用，且芦苇对土壤真菌多样性具保护作用，其根际土壤真菌的种类是无植被土壤的1.2倍。前人研究芦苇的繁育往往耗费了较长时间，无法在同一时间获得一批长势较均匀的植株，某些芦苇品种有种子可萌发育苗，而这种特（种 优）质的野生型的芦苇植物根系发达，茎秆坚硬如竹其生物学特性与一般的芦苇有别；苗基生，叶片短，叶尖锋利，株高3-4m，在我国尚未见抽穗结子现象，自然繁殖较慢。若广泛种植在我国南北方的江河湖岸边，可以提高拦阻洪水、泥沙，具有蓄洪、消减流速等作用，且有“地球之肾”的美誉。种植在湿地处理能够节能降耗、抗冲击能力强。

目前已有一些关于芦苇组织培养的报道，传统制备芦苇种苗包括茎秆扦插、种子萌发等，赵亚楠等和王洋等都是利用茎秆扦插，焦德志等是利用种子萌发，虽然有利用一些可湿性粉剂或消毒剂增加种子的萌发率的例子，但实际操作上仍旧存在一定局限性。安树青等专利《一种淡水芦苇非愈伤组织培养方法》中也讲述了淡水芦苇的快繁体系，但必须经过诱导、分化、生根等较多次培养基的转换。

因此，高效、快速获得健康芦苇种苗显得极为重要。针对以上不足并通过对现有技术的改进发明了本方法，从减少外植体褐变着手，且又快速、简便、高效、经济等优点。

发明内容

本发明通过多次优化实验流程和培养基配方，总结出一种快速、简单、高效获得非洲芦苇组培苗的方法。该方法利用分化生根一步成苗培养基达到节约经济成本且快速育苗目的。本方法操作安全、快速、简单，30多天就能完成成苗过程，从而解决了一般技术的时间长，诱导率不高，褐变易污染等缺点，以满足对其生物学实验的需要。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种快速获得非洲芦苇组培苗的方法，用芦苇的茎节进行培养，快速繁殖出成株非洲芦苇组培苗，包括以下步骤：

晴天时将采自室外的非洲芦苇枝条，剥净每节外包叶，露出小芽，用75%乙醇擦拭，茎段剪成小段，每段2-3cm长，放入瓶中，然后放置于超净工作台上。用75％乙醇浸泡30s，用无菌水漂洗3次后，用0.1％HgCl₂水溶液消毒10-15min，再用无菌水洗涤4-5次；

将消毒后的芦苇茎段接种到诱导分化生根培养基上；培养基为1/2MS培养基+IBA1.5mg/L+NAA1.5mg/L+3％白糖+4g/L植物凝胶；培养室温度为25土2℃、光强为2000lx、每日光照12h，获得可移栽组培苗。

所述培养基的pH为5.8，培养基在高压灭菌锅中121℃灭菌20min。