[发明专利]一种检测ADGRG6高频突变位点的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测ADGRG6突变位点的试剂盒，其特征在于，包括chr. 6: 142,706,206 G  A突变位点的引物G  A-F，引物G  A-R及探针G  A-PF；chr. 6:142,706,209 C  T突变位点的引物C  T-R，引物C  T-F及探针C  T-PR；内参引物Control-F，内参引物Control-R及探针Control-PR；所述引物G  A-F的序列如SEQ ID.1所示；所述引物G  A-R的序列如SEQ ID.2所示；所述探针G  A-PF的序列为5’ 6FAM-CCTCTG/iXNA_T/GGTATT/iXNA_C/T/iXNA_C/CCT/iXNA_C/CAG-BHQ-1 3’，其中/iXNA_T/、/iXNA_C/及/iXNA_G/表示锁核苷酸修饰，所述iXNA为LNA；

所述引物C  T-R的序列如SEQ ID.4所示，所述引物C  T-F的序列如SEQ ID.5所示；所述探针C  T-PR的序列为5’ 6FAM-CTACTG/iXNA_G/CTAGAGT/iXNA_C/CATG/iXNA_T/GAAA/iXNA_T/ATG-BHQ-1 3’，其中/iXNA_T/、/iXNA_C/及/iXNA_G/表示锁核苷酸修饰，所述iXNA为LNA；所述内参引物Control-F的序列如SEQ ID.7所示，所述内参引物Control-R的序列如SEQ ID.8所示；所述探针Control-PR的序列为5’ 6HEX-TGTACCTTGGATTCACTGGCCTGTC-BHQ-1 3’；

所述试剂盒用于检测ADGRG6突变位点时，包括步骤：

采用所述试剂盒对待测样品进行PCR扩增，得到扩增后样品；

测量扩增后样品的ΔCt值= Ct值FAM -Ct值HEX；

若chr. 6: 142,706,206 G  A突变位点体系扩增后样品的ΔCt值14，则判定待测样品为chr. 6: 142,706,206 G  A突变位点突变型，若扩增后样品的ΔCt值14，则判定待测样品为chr. 6: 142,706,206 G  A突变位点野生型；

若chr. 6:142,706,209 C  T突变位点体系扩增后样品的ΔCt值14，则判定待测样品为chr. 6:142,706,209 C  T突变位点突变型，若扩增后样品的ΔCt值14，则判定待测样品为chr. 6:142,706,209 C  T突变位点野生型；

所述试剂盒的反应体系包括反应体系1和反应体系2，

所述反应体系1包括：

10×PCR缓冲液 5μl，

MgCl₂ 40mM 4μl，

dNTP 2.5mM 2.5μl，

引物GA-F 10pM 2.5μl，

引物GA-R 10pM 2.5μl，

探针GA-PR 10pM 0.5μl，

Control-F 10pM 0.2μl，

Control-R 10pM 0.2μl，

Control-PR 10pM 0.5μl，

HSTaq酶 0.2μl，

DNA模板 5μl，

添加无菌双蒸水至反应体系体积为50μl；

所述反应体系2包括：

10×PCR缓冲液 5μl，

MgCl₂ 40mM 4μl，

dNTP 2.5mM 2.5μl，

引物CT-F 10pM 2.5μl，

引物CT-R 10pM 2.5μl，

探针CT-PF 10pM 0.5μl，

Control-F 10pM 0.2μl，

Control-R 10pM 0.2μl，

Control-PR 10pM 0.5μl，

HSTaq酶 0.2μl，

DNA模板 5μl，

添加无菌双蒸水至反应体系体积为 50μl。