[发明专利]一种利用基因编辑技术选育高类胡萝卜素油菜种子的方法有效
| 申请号： | 202011331971.6 | 申请日： | 2020-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN112391408B | 公开（公告）日： | 2022-12-23 |
| 发明（设计）人： | 刘超;王芳;范楚川;张椿雨;李安安;张鸿远 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H5/10;A01H6/20 |
| 代理公司： | 北京兴智翔达知识产权代理有限公司 11768 | 代理人： | 张玉梅 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 基因 编辑 技术 选育 类胡萝卜素 油菜 种子 方法 | ||
1.一种利用基因编辑技术选育高类胡萝卜素油菜种子的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）在甘蓝型油菜
所述
经筛选的所述靶点序列包括S1、S2、S3、S4和S5，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.4、SEQID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8所示；
设计的所述靶点引物包括：
对应于所述靶点S1的靶点引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示；
对应于所述靶点S2的靶点引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示；
对应于所述靶点S3的靶点引物的核苷酸序列如SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示；
对应于所述靶点S4的靶点引物的核苷酸序列如SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示；
对应于所述靶点S5的靶点引物的核苷酸序列如SEQ ID No.17和SEQ ID No.18所示；
（2）利用所述靶点引物，构建用于甘蓝型油菜定向编辑的CRISPR/Cas9重组载体pBnaCCD4；
（3）将所述pBnaCCD4载体转化甘蓝型油菜，进而获得种子中类胡萝卜素含量显著提高的株系。
2.根据权利要求1所述的利用基因编辑技术选育高类胡萝卜素油菜种子的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述CRISPR/Cas9重组载体pBnaCCD4的构建步骤包括：将设计的所述靶点引物与sgRNA靶标表达盒连接的步骤，对不同sgRNA靶标表达盒进行扩增的步骤，以及将所述sgRNA靶标表达盒与基因编辑载体pYLCRISPR/Cas9顺次连接的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的利用基因编辑技术选育高类胡萝卜素油菜种子的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述转化甘蓝型油菜的步骤为利用农杆菌介导的遗传转化方法进行转化。
4.权利要求1-3任一项所述利用基因编辑技术选育高类胡萝卜素含量的油菜种子的方法在油菜育种领域中的应用。
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