[发明专利]1,3-β-D葡聚糖衍生物、试剂盒及制备方法及测定1,3-β-D葡聚糖含量的方法

权利要求书

1.一种1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物及其制备方法，其特征在于，所述的1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物制备步骤为：

P1：将1,3-β-D葡聚糖和琥珀酸酐分别用DMF缓冲液进行溶解，得到1,3-β-D葡聚糖-DMF溶液和琥珀酸酐-DMF溶液；

P2:将1,3-β-D葡聚糖-DMF溶液加入琥珀酸酐-DMF溶液，65℃反应6h；反应完毕后加入三丁胺和氯甲酸异丁酯，室温反应30min，得到1,3-β-D葡聚糖-琥珀酸酐的DMF溶液；加入赖氨酸溶液，室温反应3h；

P3：将反应物用水透析过夜，调节PH值析出沉淀，然后将沉淀室温放置1h，4℃放置3h，在4℃离心10-15min，用Na₂CO₃缓冲液溶解沉淀，得到1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物。

2.如权利要求1所述的1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物及其制备方法，其特征在于，所述的1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物由上述方法制备得到。

3.一种测定1,3-β-D葡聚糖含量的试剂盒及其制备方法，其特征在于，该试剂盒包括生物素化1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物、抗体酶标试剂、酶标1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物、生物素化1,3-β-D葡聚糖鼠单抗、定标液和质控品。

4.如权利要求3所述的测定1,3-β-D葡聚糖含量的试剂盒及其制备方法，其特征在于，该试剂盒的制备方法如下：

(1)生物素化1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物的制备步骤如下：

通过1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物分子量(605)和生物素-NHS分子量(587)进行计算，按照摩尔比1：20的投料量称量生物素-NHS，将生物素-NHS用DMSO进行溶解后，加入权利要求2所述的1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物中，充分混匀后室温反应2h；用透析袋透析反应产物；用缓冲液将透析产物稀释至工作液浓度；

(2)抗体酶标试剂的制备过程：

将1,3-β-D葡聚糖鼠单抗和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应18h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液配置成工作液浓度；

(3)酶标1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物的制备过程：

将权利要求2所述的1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应18h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液配置成工作液浓度；

(4)生物素化1,3-β-D葡聚糖鼠单抗的制备过程：

通过1,3-β-D葡聚糖鼠单抗分子量(150000)和生物素-NHS分子量(587)进行计算，按照摩尔比1：20的投料量称量生物素-NHS，将生物素-NHS用DMSO进行溶解后，加入1,3-β-D葡聚糖鼠单抗中，充分混匀后室温反应2h，用透析袋透析反应产物，用缓冲液将透析产物稀释至工作液浓度。

(5)分装上述生物素1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物，抗体酶标试剂、酶标1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物、生物素化1,3-β-D葡聚糖鼠单抗、定标液和质控品。

5.如权利要求4所述的测定1,3-β-D葡聚糖含量的试剂盒及其制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中1,3-β-D葡聚糖鼠单抗采用0.1*的PBS进行透析，然后用2IT进行活化，得到活化后的抗体；所述步骤(3)中1,3-β-D葡聚糖抗原衍生物采用0.1*的PBS进行透析，然后用2IT进行活化，得到活化后的抗原。

6.如权利要求4所述的测定1,3-β-D葡聚糖含量的试剂盒及其制备方法，其特征在于，所述步骤(2)和(3)中的碱性磷酸酶用SMCC进行活化，得到活化后的碱性磷酸酶。