[发明专利]CYR61蛋白巯基亚硝基化修饰位点的应用

说明书

本发明提供CYR61蛋白巯基亚硝基化修饰位点的应用，属于医药领域。本发明以米非司酮为母体的衍生物美她司酮和安闽司酮及其盐、水合物，其干预人乳腺癌细胞系与内皮细胞系或巨噬细胞共孵模型，并诱导富含半胱氨酸的蛋白质发生巯亚硝基化反应，确定了富含半胱氨酸蛋白发生巯亚硝基化反应的位点，并探究蛋白质结构的变化以及对细胞生物活性的影响。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及CYR61蛋白巯基亚硝基化修饰位点的应用。

背景技术

当今社会，科技飞速发展，恶性肿瘤依旧是威胁人类生命安全的一项重大疾病。在恶性肿瘤的治疗过程中，癌症的侵袭和转移是其治疗失败并造成死亡的最主要原因，超过90%的癌症患者死于肿瘤转移。肿瘤转移由一系列离散的生物学过程组成，这些过程将肿瘤细胞从原发性肿瘤转移到远处。肿瘤细胞必须侵入原发肿瘤周围的组织，进入淋巴管或血液，存活并最终停滞在循环中，渗入组织并在新的部位生长，最终导致肿瘤转移，故如何控制恶性肿瘤的转移和侵袭是当前亟待解决的问题。

恶性肿瘤转移的过程中，起关键作用的是肿瘤细胞与血管内皮细胞的粘附，以及随后的跨血管基质迁移。肿瘤细胞与内皮细胞粘附后，血管内皮层通透性将增加，内皮细胞形态变圆，细胞间隙变大，因此肿瘤细胞很容易从中穿透，进入组织，从而形成转移。乳腺癌转移的关键步骤之一是乳腺癌细胞与肺微血管内皮细胞的相互粘附作用，此步骤与乳腺癌转移的器官特异性有关。现有研究已表明共孵模型会促进细胞的转移和侵袭，并且会增加相关蛋白的分泌。

米非司酮（Mifepristone）是一种典型的抗孕激素药物，用于防止早孕，因为它具有作为抗孕激素的功能来阻断子宫孕激素受体。 在较高浓度下，它还具有糖皮质激素受体拮抗活性。近几年，有研究发现米非司酮在恶性肿瘤的治疗方面具有一定的作用。现有报道的米非司酮对乳腺癌细胞的作用主要表现在诱导癌细胞的自噬和凋亡、调节细胞因子/受体、抑制癌细胞的增殖、改变细胞周期动力学等。美她司酮（metapristone）是米非司酮在人体内的主要活性代谢产物，故其安全性毋庸置疑，已有研究表明美她司酮在抑制癌细胞迁移、粘附和侵袭的效果显著，且能抑制结直肠癌对脐静脉内皮细胞的粘附作用，并呈剂量相关性。

蛋白质巯基亚硝基化是一氧化氮（NO）与蛋白质半胱氨酸残基的反应性巯基偶联形成巯亚硝基硫醇（SNO）的共价翻译后修饰。巯亚硝基化是重要细胞过程中基于NO的细胞信号传输的关键机制，包括转录调控，DNA修复和细胞凋亡。蛋白质的巯亚硝基化修饰可以影响蛋白质的活性以及表达，亚细胞定位及蛋白的相互作用，从而对蛋白质功能进行有效调控，进而调节细胞活性。

越来越多的研究表明巯亚硝基化修饰的蛋白与信号的转导和疾病有关。一系列蛋白都已被证实在体内外发生巯亚硝基化修饰，包括3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase，GAPDH)、兰尼碱受体(ryanodine receptor，RyR)、核因子kB(nuclear factor–kappa B,NF-kB)、蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)、caspase-3、parkin、β-actin、tubulin α等。蛋白质的巯亚硝基化修饰主要发生在半胱氨酸的巯基上，由于蛋白质具有复杂的空间结构，只有特殊位置的巯基才能发生巯亚硝基化修饰，因此，我们猜想这些发生巯亚硝基化修饰的蛋白会不会具有特殊的生物活性，故确定蛋白的巯亚硝基化位点变得至关重要。

iTRAQ（同重同位素相对和绝对定量）技术是一种质谱技术，它可以通过测量在MS/ MS期间通过裂解从iTRAQ标记的肽释放的报告离子的峰强度，对蛋白质丰度进行定量比较。iTRAQ技术定量的优势主要体现为：蛋白鉴定覆盖度和可信度高；分离能力强、灵敏度高、分析和检测范围广、低检测限、高通量。基于iTRAQ技术的药物蛋白质组学是探测新药物靶点蛋白、深入了解药物的作用机制、评价药物的作用效果、合理设计药物的有效途径。