[发明专利]一种巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料及其制备方法和应用

权利要求书

1.巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料在液态醇类定量检测上的应用，其特征在于，包括以下步骤： (a)将目标检测物醇溶液以及空白对照组PBS缓冲液，分别加入巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料，混合震荡35min后，8000rpm离心，5min后取上清液； (b)通过检测上述上清液的荧光强度，对不同浓度醇类物质进行定量检测；

其中，所述巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料包括MOFs材料UiO-66-NH₂，双功能交联试剂Sulfo-SMCC，巯基化ssDNA探针以及荧光染料RhoB；所述巯基化ssDNA探针通过双功能交联试剂Sulfo-SMCC共价修饰到MOFs材料UiO-66-NH₂表面，形成巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs材料，然后利用MOFs材料UiO-66-NH₂的高孔径率和吸附性，将荧光染料RhoB装载进巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs材料的孔洞中，形成巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料；

所述的巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料的制备方法包括以下步骤：

(1)制备MOFs材料UiO-66-NH₂；

具体包括：

(1.1)将ZrCl₄，C₈H₇NO₄和C₇H₆O₂溶解在DMF溶剂中，并超声处理，得到混合物；其中ZrCl₄，C₈H₇NO₄，C₇H₆O₂以及DMF溶剂之间比例为240mg：220mg：3.8g：20mL；超声处理时间为3min；

(1.2)将步骤（1.1）中的混合物转移到聚四氟乙烯内衬的水热反应釜中，然后置于烘箱中，反应结束后，从烘箱中取出，待母液冷却到室温，再进行离心分离沉淀；其中，烘箱温度为120℃，反应时间为20h，离心分离转速为10500rpm，时间为10min；

(1.3)用DMF和乙醇依次清洗获得的固体沉淀10min，并重复上述操作3次；

(1.4)将步骤(1.3)所得固体进行真空干燥，真空干燥温度为50℃，时间为24h，然后制成粉末状，即得MOFs材料UiO-66-NH₂；

(2)将巯基化ssDNA探针通过双功能交联试剂Sulfo-SMCC共价修饰到MOFs材料UiO-66-NH₂表面，形成巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs 材料；具体包括：

(2.1)将MOFs材料UiO-66-NH₂加入PBS缓冲液中，并超声处理；其中，每1000μL PBS缓冲液中加入1mg的MOFs材料UiO-66-NH₂，且PBS缓冲液的浓度为10mM，pH为7.2；

(2.2)制备MOFs-SMCC共聚物及配制巯基化ssDNA探针；

步骤(2.2)中制备MOFs-SMCC共聚物具体包括：

(2.2.1.1)将双功能交联试剂Sulfo-SMCC用超纯水配制为Sulfo-SMCC溶液；其中，Sulfo-SMCC溶液的浓度为10mg/mL；

(2.2.1.2)将(2.2.1.1)得到的Sulfo-SMCC溶液与(2.1)得到的MOFs材料UiO-66-NH₂溶液混合，室温下搅拌2h，得到MOFs-SMCC共聚物溶液；其中，MOFs材料UiO-66-NH₂溶液与Sulfo-SMCC溶液的体积比为：20:1；

(2.2.1.3)然后通过离心洗涤的方法，去除上清液，洗去多余的Sulfo-SMCC分子，并重复若干次，将得到的沉淀物重悬于PBS缓冲液中；其中，离心洗涤的转速为8000rpm，时间为5min；

步骤(2.2)中配制巯基化的ssDNA探针具体包括：

(2.2.2.1)将TCEP、探针ssDNA、ddH₂O进行混合，通过还原反应活化巯基基团；其中，TCEP的浓度为10mM，探针ssDNA的浓度为100μM，且TCEP、探针ssDNA和ddH₂O的体积比为1:1:8；

(2.2.2.2)室温下，还原反应持续30～60min，得到巯基化的ssDNA探针；

(2.3)将巯基化ssDNA探针与MOFs-SMCC共聚物混合震荡反应4h；

(2.4)反应结束后，获得巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs材料，最后通过离心洗涤，离心洗涤的转速为6000rpm，时间为3min，洗去多余的巯基化ssDNA探针，并将制备得到的巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs材料溶于PBS缓冲液中；

(3)将荧光染料RhoB与巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs材料混合，孵育震荡，形成巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料；

具体为：将浓度为5μM的荧光染料RhoB溶液与(2.4)制备得到的巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs材料混合，混合体积比为1:200，于37℃孵育震荡12h，然后采用PBS缓冲液进行离心洗涤，直到上清液中的背景荧光信号能够忽略不计为止，得到巯基化ssDNA探针-功能化修饰的MOFs复合物材料；最后，将上述复合物材料重悬于PBS缓冲液，4℃保存。