[发明专利]制备人参黄酮苷的方法

说明书

本发明提出了一种从待测样品中分离制备人参黄酮苷的方法。该方法包括：将待测样品通过高效液相色谱进行分离，以便获得人参黄酮苷；其中，所述高效液相色谱是在如下条件下进行的：色谱柱为分析柱或半制备柱；流动相为35％～40％甲醇水溶液；等度洗脱；流速为0.4～0.8mL/min；检测波长为210nm或350nm；柱温为28～32℃。该方法能够快速从待测样品中分离人参黄酮苷单体，人参黄酮苷单体的纯度、提取率和得率高。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体地，本发明涉及制备人参黄酮苷的方法。

背景技术

1969年，Komatsu等首次从人参茎叶中分离得到人参黄酮苷(山柰酚-3-O-β-D-半乳糖(2→1)-β-D-葡萄糖苷)，之后学者们相继研究，发现人参黄酮苷还存在于人参花蕾及其同属植物西洋参(全株)和三七(茎叶和花蕾)中，具有酶抑制、抗癌、免疫调节等作用，充分体现了黄酮类化合物的药理活性。人参、西洋参和三七作为传统名贵中药材，其化学成分和药理作用的研究主要集中在其药用部位和非药用部位的皂苷类成分，而黄酮类成分的研究还相对较少。目前，已有文献建立了人参叶、三七叶和西洋参不同部位中人参黄酮苷含量测定的方法，还有文献建立了同时测定人参叶中不同类型成分的单柱和多柱分析方法。结果表明，不同产地或不同部位样品中人参黄酮苷含量都相差较大，说明可以同时测定样品中人参黄酮苷和皂苷成分，综合评价其质量优劣。

据调研，目前人参黄酮苷对照品市场资源较少且价格昂贵，文献用的人参黄酮苷对照品都是自制所得，制备方法基本如下：样品粉末先反复提取和萃取，得到的粗流分经大孔树脂分离洗脱、分析鉴定、合并浓缩后，进一步得到含人参黄酮苷的浸膏，该浸膏还需经一系列硅胶柱、ODS/MCI柱、凝胶柱、半制备柱等反复分离和纯化后才能得到目标化合物单体，再经红外、薄层色谱、高效液相反相色谱、质谱、核磁等方法鉴定验纯后，最终确定为人参黄酮苷。该法操作繁琐、耗时较长，反复柱层析吸附损耗样品导致得率低。同时，该法还需消耗大量有机试剂或有毒试剂，危害人体健康。如急需适量对照品用于定性或快速分析评价，采购对照品或按当前文献方法制备明显都是不合适的。

因此，建立一种快速制备并鉴定人参黄酮苷地方法，既能提高人参、西洋参和三七非药用部位的回收利用率，又为整体质量评价奠定基础，显得尤其重要和紧迫。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

为此，本发明首次采用在线HPLC-SPE-NMR-MS联用系统，利用常规分析色谱柱，30min内可直接从人参叶粉末中制备得到并鉴定了的高纯度(95％)人参黄酮苷单体，并且在普通高效液相色谱仪上实现了提取-分析-制备只需16min。本专利建立的方法快速高效、可重复且提取率高(90％以上)，与现有技术相比，本专利制备得到的人参黄酮苷单体得率也得到了很大的提高，这为人参黄酮苷化合物的少量快速制备提供了技术支持。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种从待测样品中分离制备人参黄酮苷的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待测样品通过高效液相色谱进行分离，以便获得人参黄酮苷；其中，所述高效液相色谱是在如下条件下进行的：色谱柱为分析柱或半制备柱；流动相为35％～40％甲醇水溶液；等度洗脱；流速为0.4～0.8mL/min；检测波长为210nm或350nm；柱温为28～32℃。根据本发明实施例的方法，能够快速从待测样品中分离人参黄酮苷单体，且人参黄酮苷单体的纯度、提取率和得率高。

根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述流动相为35％甲醇水溶液。发明人发现，当采用35％甲醇水溶液作为流动相时，人参黄酮苷与其他化合物峰分离度较好，峰形宽度更合适，能明显看到人参黄酮苷色谱峰前后包埋的杂峰，更有利于人参黄酮苷单体化合物的分离纯化。

根据本发明的实施例，所述等度洗脱为单流动相等度洗脱。进而进一步保证人参黄酮苷单体化合物的出峰稳定，节约制备时间，提高整体效率。