[发明专利]一种灵芝孢子总三萜酸的提取优化方法

说明书

本发明提供一种灵芝孢子总三萜酸的提取优化方法，先将若干灵芝孢子粉破壁，再分批进行超声提取，合并提取液并过滤，减压浓缩后得粗提物，后将粗提物进行简单除杂，粗提物经大孔树脂吸附后，用乙醇洗脱树脂，挥干溶剂后得灵芝孢子总三萜酸提取物；本申请通过优化超声提取、乙酸乙酯萃取的条件，最大程度地保证灵芝孢子总三萜酸的所得率和纯度，且有机溶剂消耗少，提取效率高，可进行规模化工业生产。

技术领域

本发明涉及植物深加工技术领域，具体涉及一种灵芝孢子总三萜酸的提取优化方法。

背景技术

灵芝，又名黑芝、赤芝、紫芝、灵芝草、万年蕈等。作为一种传统的药食两用真菌，灵芝在我国已经具有两千多年的用药历史，最早记载于汉代的《神农本草经》，灵芝具有扶正固本、滋养身体、延年益寿、维持机体平衡等功效，是我国非常名贵的药用真菌之一。灵芝孢子是在灵芝生长的成熟期从菌盖弹射出来的一种极其细小的孢子，为灵芝的生殖细胞。三萜是灵芝中主要的活性物质之一，研究发现，从灵芝中分离出400余种化合物，其中超过150种属于三萜类化合物。

灵芝三萜类化合物的活性已被广泛研究。各项研究表明，灵芝三萜对于多种疾病都有显著的药理学和治疗活性。从灵芝孢子中分离出的灵芝酮二醇、灵芝酮三醇、三萜酸β、灵芝酸A等表现出非常明显的抗HIV-1蛋白酶活性，其发挥作用的IC50值为20~90μM，另有抗氧化，保肝抗炎，调节免疫，抗肿瘤，抗病原微生物及强烈的抑制α-葡萄糖苷酶效果等。

灵芝三萜类化合物的结构相似，大多数易溶于有机溶剂难溶于水。目前对于灵芝三萜的提取方法主要包括：溶剂提取法、超声提取法和超临界CO2提取法等。传统的溶剂提取法主要用甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂，在一定温度下进行回流提取，原理相对简单，对设备要求不高，但溶剂用量大，且容易有残留，提取效率也相对比较低，条件不同时，提取效果差异较明显。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种灵芝孢子总三萜酸的提取优化方法。

本发明的目的采用以下技术方案来实现：

一种灵芝孢子总三萜酸的提取优化方法，包括以下步骤：

S1、先将干燥之恒重的灵芝孢子破壁，精密称取灵芝孢子粉2g，置锥形瓶中。加入浓度90%的乙醇100mL，浸泡40min；

S2、超声提取仪温度设置至30℃，将S1所得溶液提取15min，得到提取液，过滤除杂；

S3、将提取液在转速为4500r/min的条件下离心15min，取上清液；

S4、将大孔树脂于95%乙醇溶液中浸洗30h后，用蒸馏水清洗至无醇味，再用6%盐酸浸泡20h，用蒸馏水洗至pH5.0后，用6%氢氧化钠浸泡20h，再用蒸馏水洗至pH5.0，用蒸馏水浸泡备用；

S5、准确称取已预处理的大孔树脂3g，置于100ml具塞三角瓶中，加入S3所得上清液，室温振荡吸附24h后，测定总三萜酸溶液的浓度。

S6、用95%的乙醇20ml溶液洗脱树脂后挥干溶剂，得灵芝孢子总三萜酸提取物。

优选的，所述浸泡用乙醇浓度为90%、100mL。

优选的，所述超声提取仪温度为30℃，提取时间为15min。

优选的，所述离心条件为转速4500r/min，时间为15min。

优选的，所述预处理的大孔树脂制备过程为：

将大孔树脂于95%乙醇溶液中浸洗30h后，用蒸馏水清洗至无醇味，再用6%盐酸浸泡20h，用蒸馏水洗至pH5.0后，用6%氢氧化钠浸泡20h，再用蒸馏水洗至pH5.0，用蒸馏水浸泡备用。

优选的，洗脱树脂用乙醇浓度为95%。