[发明专利]一种米尔贝霉素发酵液的分离纯化方法

说明书

本发明提供了一种米尔贝霉素发酵液的分离纯化方法，涉及生物发酵制药领域，该方法包括以下步骤：(1)发酵液预处理：将米尔贝霉素发酵液加热保温后，经絮凝、过滤，得到菌丝渣；所述絮凝过程使用的絮凝剂为硅藻土‑聚合硫酸铁‑改性活性炭复合絮凝剂；(2)初步纯化：将菌丝渣干燥后，加入无水乙醇，搅拌并过滤得到滤液，减压浓缩得到浸膏，加入乙醇溶液，得到粗提液；(3)高度纯化：使用大孔树脂上样粗提液进行吸附，除杂后使用乙醇溶液洗脱，得到精提液；(4)结晶干燥：将精提液析晶、离心并干燥后得到米尔贝霉素。通过上述过程分离纯化米尔贝霉素发酵液能够提高产品的收率同时保证产品的质量。

技术领域

本发明涉及生物发酵制药领域，具体涉及一种米尔贝霉素发酵液的分离纯化方法。

背景技术

米尔贝霉素是一种从发酵液中分离出来的具有十六环内酯混合物的微抗生素，具有极佳的杀虫、杀螨、驱虫及抗肿瘤等生物学活性，米尔贝霉素在使用时用药量较少且对人体无害，是较为广谱、高效且抗虫无交叉抗性的生物杀虫剂。因此，高纯度、高收率米尔贝霉素的制备具有十分重要的意义。

目前，米尔贝霉素相关的分离纯化方法多使用甲醇等溶剂进行浸提等，例如文献：陈小龙,郑裕国,沈寅初.生物农药米尔贝霉素的研究进展[J].农药,2003,42(4):5-5.但甲醇等溶剂存在一定毒性，消耗量大且对人体造成危害，制备得到的米尔贝霉素也存在低收率以及低纯度的问题。针对此类问题，研究者们对米尔贝霉素的制备方法进行了一定程度的改进，如中国专利CN104557967B公开了一种高纯度米尔贝霉素的生产方法，该方法将含米尔贝霉素α1和α3的发酵液的菌渣用第一溶媒水溶液进行提取，提取液经非极性大孔树脂层析纯化，将解吸液超滤，并纳滤浓缩小体积后加入水通过第二溶媒反萃，得到的萃取液浓缩后，用第三溶媒水溶液洗涤，得到的第三溶媒水溶液浓缩后再次加水和用第二溶媒反萃，最终得到的产品纯度较高，但该发明获得高纯度产品的同时极大地牺牲了产品的收率。文献：谢捷,施睿,匡春兰,等.大孔树脂分离纯化米尔贝霉素工艺研究[J].浙江工业大学学报,2014,42(004):413-417.对大孔吸附树脂以及工艺条件进行筛选，最终得到的工艺具有吸附率和解吸率高、洗脱剂安全低毒的特点，但同样也存在收率较低的问题。

中国专利CN106977525B也同样公开了一种米尔贝霉素制备方法，该方法将米尔贝霉素湿菌渣干燥后，采用乙醇进行浸提，过滤后使用正己烷、正庚烷或正辛烷等溶剂与水对米尔贝霉素浸提乙醇液进行萃取，并将萃取液进行浓缩，制得待上柱液；将待上柱液用柱层析法进行分离纯化，再使用丙酮-正己烷、丙酮-正庚烷或丙酮-正辛烷为洗脱液，得米尔贝霉素有效组分，然后浓缩得到米尔贝霉素。该发明中米尔贝霉素的纯度与收率均较高，但该方法中需要使用到丙酮等毒性较大的物质作为洗脱液，将对人体以及环境等产生不良的影响。

针对现有的米尔贝霉素发酵液的分离纯化方法所存在的纯度低、收率低以及对人体、环境造成危害等缺陷，亟需寻找一种分离纯化方法，在获得高纯度米尔贝霉素的同时也能够避免收率的多度降低以及环境的危害。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种米尔贝霉素发酵液的分离纯化方法，该方法通过改进絮凝剂和絮凝条件以及优化其他相关参数，在提高产品的收率同时能够保证产品的质量。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种米尔贝霉素发酵液的分离纯化方法，包括以下步骤：

(1)发酵液预处理：将米尔贝霉素发酵液加热保温后，经絮凝、过滤，得到菌丝渣；

所述絮凝过程使用的絮凝剂为硅藻土-聚合硫酸铁-改性活性炭复合絮凝剂；

(2)初步纯化：将菌丝渣干燥后，加入无水乙醇，搅拌并过滤得到滤液，减压浓缩得到浸膏，加入乙醇溶液，得到粗提液；

(3)高度纯化：使用大孔树脂上样粗提液进行吸附，除杂后使用乙醇溶液洗脱，得到精提液；