[发明专利]一种ω转氨酶及其突变体、重组质粒、基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种ω转氨酶突变体，其特征在于，所述ω转氨酶突变体由氨基酸序列如SEQ IDNo：2所示的ω转氨酶的氨基酸序列发生突变得到，所述ω转氨酶突变体包括：BPTA_W82A，BPTA_W82A/M78F，BPTA_W82A/I284F，BPTA_W82A/T440Q，BPTA_{M78F/W82A/I284F/T440Q}中的任意一种。

2.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒由根据权利要求1所述的ω转氨酶突变体的编码序列与表达载体质粒连接构建而成。

3.一种ω转氨酶基因工程菌，其特征在于，所述ω转氨酶基因工程菌表达如权利要求1所述的ω转氨酶突变体。

4.一种如权利要求1所述的ω转氨酶突变体在合成手性胺类产品中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，如权利要求1所述的ω转氨酶突变体被用于催化1-苯丙酮生成（S）-1-苯丙胺。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括：将如权利要求1所述的ω转氨酶突变体作为催化剂，在以下三种级联反应体系中进行催化反应：

ⅰ）100 mM pH 8.0Tris-HCl、ω转氨酶突变体菌株冻干菌粉10 g/L、丙酮酸脱羧酶（PDC）10 g/L、100mM 1-苯丙酮、500~1000 mM L-丙氨酸、5%~15% v/v DMSO、0.5~1 mMPLP；

ⅱ）100 mM pH 8.0Tris-HCl、ω转氨酶突变体菌株冻干菌粉10 g/L、乳酸脱氢酶（LDH）5g/L、葡萄糖脱氢酶（GDH）5g/L、100mM 1-苯丙酮、500 ~1000 mM L-丙氨酸、5%~15% v/vDMSO、0.5~1 mMPLP、0.25~0.5mMNAD⁺、葡萄糖150~250g/L；

ⅲ）100 mM pH 8.0Tris-HCl、ω转氨酶突变体菌株冻干菌粉10 g/L、氨基酸脱氢酶（AADH）5g/L、葡萄糖脱氢酶（GDH）5g/L、100mM 1-苯丙酮、500~1000 mM L-丙氨酸、5%~15%v/v DMSO、0.5~1 mMPLP、0.25~0.5mMNAD⁺、葡萄糖150~250g/L、甲酸铵150~250mM；

其中，上述三种级联反应体系都是在30~37℃条件下进行反应，反应结束后，先将反应液调酸至pH为1~1.5，反应液用乙酸乙酯萃取，舍去萃取相，后将反应液调碱至pH为13~13.5，收集萃取相，离心，取有机相减压蒸馏回收乙酸乙酯，得到淡黄色油状液体即为（S）-1-苯丙胺粗品。