[发明专利]基于血清中单个外泌体转录因子TAZ水平的标志物在制备治疗肺癌诊断中的应用

权利要求书

1.一种基于血清中单个外泌体转录因子TAZ水平的标志物在制备治疗肺癌诊断中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述单个外泌体转录因子TAZ水平在肺癌患者血清中降低。

3.一种基于血清中单个外泌体转录因子TAZ水平的标志物在作为肺癌诊断阴性标志物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：单个外泌体转录因子TAZ单独作为阴性标志物和/或其他除外泌体转录因子TAZ以外的标志物在血清中联合使用。

5.一种根据权利要求1所述的基于血清中单个外泌体转录因子TAZ水平的标志物的检测方法，其特征在于：其包括如下步骤：

(1)、将受试者的血液收集并常温放置15±0.1min，凝血之后离心，吸取上清液并将其离心；

(2)、将步骤(1)离心后的上清液超速离心，取沉淀物用磷酸缓冲盐溶液重悬，再次超速离心，得到外泌体；

(3)、将所述外泌体用磷酸缓冲盐溶液重悬后，稀释，并进行外泌体浓度检测；

(4)、取步骤(3)的等量外泌体并加入上样缓冲液裂解，使得蛋白变性，将蛋白分离开，用TAZ蛋白的抗体孵育使其显色，所得的值除以外泌体数量得到单个外泌体转录因子TAZ水平。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述凝血之后的离心的转速为3000±10rpm，时间为10±0.1min；吸取上清液后离心的转速为(3000±10)×g，时间为15±0.1min。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述外泌体的提取方法选自ExtraPEG法、SBI ExoQuick法、磁珠法、尺寸排阻色谱法、超滤法、微流控法和超速离心法中的一种以上；和/或，

步骤(2)中，所述超速离心的转速均为(100000±100)×g，时间均为70±0.1min。

8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述外泌体浓度检测的方法选自纳米流式分析仪、动态光散射、流式细胞分选、外泌体蛋白定量和纳米颗粒跟踪分析中的一种以上。

9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤(4)中，所述TAZ蛋白的表达水平的测量方法选自蛋白芯片分析法、免疫测量法、配体结合分析法、基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱分析、表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱分析、放射免疫分析法、放射免疫扩散法、免疫扩散法、火箭免疫电泳、免疫组织化学染色法、补体固定法、二维电泳分析、液相色谱-质谱、液相色谱-质谱/质谱、西方墨点法、酶联免疫吸附法和Western blot法中的一种以上。

10.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤(4)中，所述裂解的温度为95±1℃，时间为5±0.1min。