[发明专利]三维培养肺及肺癌组织类器官的标准化培养基及培养方法

说明书

本发明公开了一种三维培养肺及肺癌组织类器官的标准化培养基及培养方法，包括试剂A和试剂B中的至少一种或多种；试剂A包含R‑spondin1、Noggin、N‑乙酰半胱氨酸、烟酰胺、Y‑27632、A8301、SB202190、FGF‑7和FGF‑10中的一种或多种；试剂B包含试剂B1、试剂B2和试剂B3；试剂B1包含牛垂体蛋白质抽提液、Y‑27632、DAPT、氢化可的松、胰岛素、庆大霉素、两性霉素、维A酸、转铁蛋白、甲碘安、肾上腺素和人表皮生长因子中的一种或多种；试剂B2包含肝素；试剂B3包含DMEM/F12、L‑ascorbic acid‑2‑phosphate magnesium和sodium selenium中的一种或多种。本发明针对于肺组织中成体干细胞的生长特点，选用了多种生长因子成份进行调和，经过优化培养基中生长因子的配比，正常的肺组织及肺癌细胞能够有效地在三维培养环境中形成肺和肺癌的类器官。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种三维培养肺及肺癌组织类器官的标准化培养基及培养方法。

背景技术

类器官技术是近些年生物学领域一项重大的突破。通过类器官培养技术，科学家们建立起了全新的体外培养的模型，用来培养正常或者病变癌组织。正常类器官可以模拟正常组织的形态，结构和功能性特征；癌的类器官表现出在体癌肿的形态学特点，基因突变谱和表型特点。正常及癌类器官可以在体外长期稳定的培养，所以类器官培养技术可以将大部分活体的生物学过程在培养皿中进行，这一革命性的技术进步为癌症及人体生物学的研究建立一个全新的平台，肿瘤类器官更是为肿瘤患者的个性化治疗提供巨大的帮助。目前科学家们已经成功建立了人体主要器官及其肿瘤的类器官培养体系。

然而，作为一项新兴的技术，很多器官的类器官三维培养缺少标准化的培养基。尽管已有报道在不同三维培养条件下，可以成功培养出肺和肺癌的类器官。但是，到目前为止，还没有一种标准化的培养基。这种现状制约了肺和肺癌类器官的在研究和临床治疗中的广泛的应用。

发明内容

为了解决肺/肺癌组织体外类器官培养过程中缺少标准化培养基的问题，本发明的目的在于提供一种三维培养肺及肺癌组织类器官的标准化培养基及培养方法，本发明的培养基针对于肺组织中成体干细胞的生长特点，选用了多种生长因子成份进行调和，经过优化培养基中生长因子的配比，正常的肺组织及肺癌细胞能够有效地在三维培养环境中形成肺和肺癌的类器官。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种三维培养肺及肺癌组织类器官的标准化培养基，包括试剂A和试剂B中的至少一种或多种；

试剂A包含R-spondin1、Noggin、N-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、Y-27632、A8301、SB202190、FGF-7和FGF-10中的一种或多种；

试剂B包含试剂B1、试剂B2和试剂B3；

试剂B1包含牛垂体蛋白质抽提液、Y-27632、DAPT、氢化可的松、胰岛素、庆大霉素、两性霉素、维A酸、转铁蛋白、甲碘安、肾上腺素和人表皮生长因子中的一种或多种；

试剂B2包含肝素；

试剂B3包含DMEM/F12、L-ascorbic acid-2-phosphate magnesium和sodiumselenium中的一种或多种。

优选地，在试剂A中，以标准化培养基的终体积为基准来计算，R-spondin1的浓度为10%，Noggin的浓度为10%，N-乙酰半胱氨酸的浓度为0.125~12.5mM，烟酰胺的浓度为1~100mM，Y-2763的浓度为2.5~250uM，A8301的浓度为50~5000nM，SB202190的浓度为0.1~100uM，FGF-7的浓度为0.5~50ng/ml，FGF-10的浓度为l2~120ng/ml。