[发明专利]一种链霉菌及其发酵产乐普霉素B的方法

说明书

本发明公开了一种链霉菌(Streptomyces sp.)HDCC00025，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.20886，保藏日期为2020年10月14日。所述的链霉菌(Streptomyces sp.)为一株全新的乐普霉素B产生菌，生产能力高，其产生乐普霉素B的能力比现有技术中其他菌种有了大幅度的提高，乐普霉素B的效价可维持在1200mg/L以上，有利于实现工业化生产。

技术领域

本发明涉及工业微生物发酵技术领域，具体涉及一种链霉菌及其发酵产乐普霉素B的方法。

背景技术

乐普霉素B(Leptomycin B)(CAS号：87081-35-4)是一种不饱和支链脂肪酸，分子式是C₃₃H₄₈O₆，分子量为540.73，化学结构式如图4所示。

乐普霉素B最初发现于链霉菌Streptomyces sp.ATS1287的发酵液中(HamamotoT,Gunji S,Tsuji H,Beppu T.Leptomycins A and B,new antifungal antibiotics.I.Taxonomy of the producing strain and their fermentation,purification andcharacterization.J Antibiot(Tokyo).1983；36(6):639-645.doi:10.7164/antibiotics.36.639)，被鉴定为具有抗真菌活性的不饱和支链脂肪酸。

乐普霉素B作为一种常用的出核转运抑制剂，可以通透细胞，抑制细胞核向细胞浆的蛋白转运，其抑制出核转运的机理为乐普霉素B可以直接与CRM1 (Chromosomemaintenance protein 1，一种参与细胞主动运输的核出口受体)结合，抑制CRM1与靶输出蛋白的核定位信号相互作用，从而抑制CRM1和带有出核信号的蛋白结合，最终导致由CRM1介导的出核转运的抑制。

近年来，随着研究的深入，发现该化合物具有显著的抗肿瘤活性，因此，乐普霉素B在抗恶性肿瘤方面也成为一种潜在的靶向性药物。2017年Lorenzo Brunetti等人在《Blood》杂志上发表的文章中表明，乐普霉素B通过抑制突变型NPM1蛋白出核，从而诱导急性髓细胞白血病(AML)M2亚型患者白血病细胞分化(Brunetti,Lorenzo et al AcuteMyeloid Leukemia with Mutated NPM1 Is Dependent on the CytoplasmicLocalization of NPM1c,[J]Blood,2017,877.)。2018 年殷倩倩等人在《中国病理生理杂志》发表的文章中表明，通过抑制RUNX3蛋白出核转运，LMB可明显降低乳腺癌细胞的活力并抑制乳腺癌细胞的增殖(殷倩倩,马东慎,魏瑜,刘慧.不同分子亚型乳腺癌细胞系中RUNX3蛋白表达及定位研究[J].中国病理生理杂志,2018,34(09):1603-1609.)。

乐普霉素B发酵方面，现有的技术中，Hamamoto T等人报道了通过培养链霉菌Streptomyces sp.ATS1287并经分离纯化后，可获得一定量的乐普霉素B，但是，发酵液中乐普霉素B在菌丝体中的最高效价约40mg/L，发酵水平较低，菌种较为原始，不适于工业化的应用(Hamamoto T,Gunji S,Tsuji H,Beppu T. Leptomycins A and B,new antifungalantibiotics.I.Taxonomy of the producing strain and their fermentation,purification and characterization.J Antibiot(Tokyo). 1983；36(6):639-645.doi:10.7164/antibiotics.36.639)。因此，寻找一种新的可高效发酵获得乐普霉素B的菌种具有重要的意义。

发明内容