[发明专利]一种SARS-CoV-2S蛋白IgG的间接ELISA检测方法

说明书

一种SARS‑CoV‑2S蛋白IgG的间接ELISA检测方法，包括下列步骤：将采用ELISA包被液稀释的新冠病毒刺突蛋白加入酶标板，每孔100μL，4℃过夜，PBST缓冲液清洗；加250μL 5%的脱脂奶粉溶液进行封闭，ELISA抗体稀释液稀释待检测血清作为一抗，每孔加100μL一抗，37℃孵育1h；ELISA抗体稀释液稀释的辣根过氧化物标记抗人IgG作为二抗，每孔加100μL二抗，37℃孵育45min，每孔避光加入100μL单组分TMB显色液，37℃孵育5min，每孔加入50μL终止液，检测波长450nm，参比波长630nm，酶标仪检测450nm吸光度值OD_450nm值。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，涉及一种SARS-CoV-2S蛋白IgG的间接ELISA检测方法。

背景技术

在2019年12月发现的与严重肺炎相关的冠状病毒科新成员最初被称为2019新冠状病毒(2019-nCoV)，目前被称为严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)，引起冠状病毒疾病2019(COVID-19)。SARS-CoV-2与另一种人类冠状病毒(severe acuterespiratory syndrome coronavirus(SARS-CoV))有着高度同源性。SARS-CoV-2通过飞沫传播，也可能通过粪口途径传播。COVID-19病例发病症状为干咳、发热、浑身酸痛无力、腹泻，病情严重的病例的临床表现为高热、呼吸困难、血氧水平低，死亡病例多数死于呼吸衰竭以及细胞因子风暴导致的多器官衰竭。冠状病毒表面的同源三聚体介导病毒进入宿主，这是一种跨膜刺突糖蛋白，是抗体产生的主要靶点，SARS-CoV与SARS-CoV-2Spike蛋白(Sprotein)通过与血管紧张素酶2(ACE2)相互作用进入靶细胞，以SARS-CoV-2S蛋白为抗原制备的多克隆抗体可以有效地抑制SARS-CoV-2假病毒进入靶细胞，但机体产生抗体的变化规律目前还有待于人们进一步认识。

虽然疫情已经得到良好有效的控制，但仍旧有很多问题需要深入的研究。目前，几种基于聚合酶链反应(PCR)的技术检测病毒RNA是确定新冠病毒感染诊断的主要方法，但是基于呼吸道标本的核酸检测阳性率低，单一的核酸检测结果可能会造成新冠病人漏诊，需要开发其他方法对核酸检测进行补充，同时，实时荧光定量PCR(quantitative real-timePCR RT-qPCR)只能检测标本中是否存在病毒，但并不能反映病例的体液免疫应答情况。

发明内容

本发明的目的在于提供一种SARS-CoV-2S蛋白IgG的间接ELISA检测方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种SARS-CoV-2S蛋白IgG的间接ELISA检测方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤1：将采用ELISA包被液稀释的新冠病毒刺突蛋白加入酶标板，每孔100μL，4℃过夜，然后用PBST缓冲液清洗酶标板三次，每次静置1分钟；

步骤2：向酶标板的每孔加250μL的质量分数为5％的脱脂奶粉溶液进行封闭，4℃过夜，然后用PBST缓冲液清洗酶标板三次，每次静置1分钟；

步骤3：将ELISA抗体稀释液稀释待检测血清作为一抗，向步骤2得到的酶标板的每孔加100μL一抗，37℃孵育1h，然后用PBST缓冲液清洗酶标板三次，每次静置1分钟；

步骤4：将ELISA抗体稀释液稀释的辣根过氧化物标记抗人IgG作为二抗，向步骤3得到的酶标板的每孔加100μL二抗，37℃孵育45min，然后用PBST缓冲液清洗酶标板三次，每次静置1分钟；

步骤5：步骤4得到的酶标板的每孔避光加入100μL单组分TMB显色液，37℃孵育5min，每孔加入50μL终止液，震荡混匀，采用终点法，检测波长450nm，参比波长630nm，酶标仪检测450nm吸光度值OD_450nm值；