[发明专利]发育正常无肌间刺鱼类新品种培育方法

说明书

发育正常无肌间刺鱼类新品种培育方法，涉及一种无肌间刺鱼类新品种培育方法。本发明提供了一种在不影响鱼类正常生长的情况下，将肌间刺去除的方法。本发明发育正常无肌间刺鱼类新品种培育方法：一、敲除原有鱼类品种受精卵中的bmp6基因，获得F₀代个体；二、对F₀代进行突变体筛选，配组获得F₁代群体；三、对F₁代群体进行突变体筛选，选取具有相同移码突变的个体进行交配，构建F₂代，筛选出F₂中的纯合突变个体；四、对F₂代纯合突变个体进行扩繁，获得无肌间刺鱼类的新品种。本发明能够获得肌间刺缺失的品系，且不影响生长，能够稳定遗传，可以解决生产上肌间刺小，难以发现，不易剔除的难题。

技术领域

本发明涉及一种无肌间刺鱼类新品种培育方法。

背景技术

根据世界粮农组织的报告，全球鱼类养殖产量的90％来自于27种鱼类，而在这27种鱼类中有12种含有肌间刺，养殖产量占鱼类养殖产量的69％以上。肌间刺是硬骨鱼类的一种特有骨骼，位于肌节间的小骨骼，由肌腱或韧带骨化而来。因肌间刺的存在，会造成人们在食用过程中的不便，甚至身体伤害，同时也造成了鱼肉产品加工上的麻烦，因此肌间刺的遗传改良成为鱼类遗传育种的重要目标性状之一。

目前已有采用杂交育种制备少肌间刺品系的方法，如国家发明专利“异育银鲫新品系优化选育育苗方法”(专利号：ZL201010140103.X)和“一种生长快及少肌间刺的杂交鲂鲌的构建方法”(专利公开号：CN201710788633)，获得了肌间刺数量少的异育银鲫新品系和鲂、鲌杂交新品种。随着基因编辑技术的发展，鲍宝龙等(发明专利申请号：202010451275.2)采用基因编辑对鲢、鳙mstn基因进行了敲除，建立了肌间刺变粗的鲢和鳙新品种选育方法。高泽霞等研究发现，在斑马鱼中敲除scxa基因，可获得肌间刺数量减少70％以上的品系(发明专利申请号：201911104496.6；Nie et al.,2020)，但根据研究发现，此肌间刺数量减少的斑马鱼品系肋骨等主轴骨骼发育异常，影响了鱼体的正常生长(Nieet al.,2020；Kague et al.,2019)。虽然目前有采用基因编辑技术减少肌间刺数量的方法，但均有一些缺陷，影响鱼类正常生长。

发明内容

本发明提供一种在不影响鱼类正常生长的情况下，将肌间刺去除的方法。

本发明发育正常无肌间刺鱼类新品种培育方法：

一、敲除原有鱼类品种受精卵中的bmp6基因，获得F₀代个体；

二、对F₀代进行突变体筛选，配组获得F₁代群体；

三、对F₁代群体进行突变体筛选，选取具有相同移码突变的个体进行交配，构建F₂代，筛选出F₂中的纯合突变个体；

四、对F₂代纯合突变个体进行扩繁，获得无肌间刺鱼类的新品种。

本发明通过基因编辑技术定向编辑鱼类的bmp6基因，能够获得肌间刺缺失的品系，且不影响生长，能够稳定遗传，可以解决生产上肌间刺小，难以发现，不易剔除的难题。通过基因编辑的方法可获得大量可稳定遗传的突变体鱼类。

附图说明

图1是实施例1突变检测交配策略示意图；Wild type为野生型个体、Cas9F₀为显微注射F₀代个体。

图2是实施例1中野生型菌落PCR产物测序峰图，下划线为靶位点，方框为bmp6基因敲除位点。

图3是实施例1中突变型菌落PCR产物测序峰图，下划线为靶位点，方框为bmp6基因敲除位点。