[发明专利]一种双色荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种双色荧光探针，其特征在于，所述双色荧光探针中含有罗丹明、水杨醛和荧光增强结构；

所述双色荧光探针的结构式为：。

2.根据权利要求1所述的双色荧光探针，其特征在于，所述双色荧光探针在不同浓度的氢离子条件下发射出不同波段的荧光，当所测区域氢离子浓度高于1µM，探针的发射区域在近红外区。

3.一种双色荧光探针的制备方法，其特征在于，包括：

（1）2-氨基-3'，6'-双（二乙氨基）螺[异吲哚啉-1,9'-黄嘌呤] -3-酮的制备：

向含罗丹明衍生物的乙醇溶液中滴加N₂H₄·H₂O，回流反应，然后过滤、洗涤、乙醇重结晶、干燥，得到浅粉红色固体2-氨基-3'，6'-双（二乙氨基）螺[异吲哚啉-1,9'-黄嘌呤] -3-酮；

（2）4-（二乙氨基）-2-（2,4-二硝基苯氧基）苯甲醛的制备：

将水杨醛衍生物、含1-氟-2,4-二硝基苯和K₂CO₃的DMF溶液混合反应，然后加入乙酸乙酯稀释，洗涤，去除有机相，过滤，所得固体通过柱色谱纯化，用正己烷洗脱，得到棕黄色化合物4-（二乙氨基）-2-（2,4-二硝基苯氧基）苯甲醛；

（3）双色荧光探针的制备：

将2-氨基-3'，6'-双（二乙氨基）螺[异吲哚啉-1,9'-黄嘌呤] -3-酮、4-（二乙氨基）-2-（2,4-二硝基苯氧基）苯甲醛、无水乙醇混合，超声，过滤，所得固体使用硅胶柱色谱法纯化，用正己烷和二氯甲烷的混合溶液洗脱，得到双色荧光探针；

所述步骤（1）~（2）不分先后顺序。

4.根据权利要求3所述的双色荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述罗丹明衍生物和N₂H₄·H₂O的摩尔比为1:6~9；所述回流反应的时间为5~48h。

5.根据权利要求3所述的双色荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述罗丹明衍生物为罗丹明B、2-（3,6-双（二甲氨基）-9H-氧杂蒽-9-基）苯甲酸、2-（3,6-双（二异丁胺基）-9H-氧杂蒽-9-基）苯甲酸中的任一种。

6.根据权利要求3所述的双色荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述水杨醛衍生物、1-氟-2,4-二硝基苯和K₂CO₃的摩尔比为1:1~3:2~5；所述混合反应的时间为0.5~6h。

7.根据权利要求3所述的双色荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述水杨醛衍生物为4-（二甲氨基）水杨醛、4-（二乙氨基）水杨醛和4-（二丙氨基）水杨醛中的任一种。

8.根据权利要求3所述的双色荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述将2-氨基-3'，6'-双（二乙氨基）螺[异吲哚啉-1,9'-黄嘌呤] -3-酮、4-（二乙氨基）-2-（2,4-二硝基苯氧基）苯甲醛、无水甲醇的用量比为1g: 0.5~2g:20~60ml。

9.根据权利要求3所述的双色荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述超声反应的条件为60℃下超声1~6h。

10.权利要求1所述的双色荧光探针在以非治疗和诊断目的定量识别生物体内的氢离子中的应用。