[发明专利]一种谷氨酸脱氢酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 202011353159.3 | 申请日： | 2020-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN112280760B | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 穆晓清;徐岩;周峰 | 申请（专利权）人： | 宿迁市江南大学产业技术研究院 |
| 主分类号： | C12N9/06 | 分类号： | C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P41/00;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 223800 江苏省宿迁市宿迁经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 谷氨酸 脱氢酶 突变体 及其 应用 | ||
1.一种谷氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述谷氨酸脱氢酶突变体为，将出发氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的谷氨酸脱氢酶的第116位氨基酸由赖氨酸突变为丝氨酸，并将第348位氨基酸由天冬酰胺突变为亮氨酸；
或将出发氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的谷氨酸脱氢酶的第116位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸，并将第348位氨基酸由天冬酰胺突变为蛋氨酸；
或将出发氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的谷氨酸脱氢酶的第116位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酰胺，并将第348位氨基酸由天冬酰胺突变为蛋氨酸。
2.编码权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶突变体的基因。
3.携带权利要求2所述基因的重组质粒。
4.如权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，以pET-28a为出发质粒。
5.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞携带权利要求2所述基因，或携带权利要求3或4所述的重组质粒。
6.如权利要求5所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞以细菌或真菌为宿主细胞。
7.权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶突变体的制备方法，所述方法为：将权利要求5或6所述的重组细胞接入到培养基中，于37℃条件下培养至菌密度OD达到0.5-0.7后，加入IPTG诱导剂，于17℃诱导15-17h后收集菌液，将得到的菌液离心收集菌体，将得到的菌体经重悬、破碎后得到细胞破碎液，将细胞破碎液离心收集上清液，分离上清液中的谷氨酸脱氢酶突变体。
8.一种(R)-4-氨基戊酸的合成方法，其特征在于，所述方法为：将权利要求1所述的突变体加入到含有葡萄糖脱氢酶、4-氧代戊酸、葡萄糖和NH4Cl-NH3·H2O缓冲液的反应体系中进行反应得到。
9.权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶突变体，或权利要求2所述的基因，或权利要求3或4所述的重组质粒，或权利要求5或6所述重组细胞在制备(R)-4-氨基戊酸中的应用。
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