[发明专利]一种双酚A的检测方法、荧光检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测双酚A的免标记荧光检测方法，包括以下步骤：

（1）核酸适配体和催化链碱基互补得到复合物A，引发链和辅助链碱基互补得到复合物B；

（2）在待测样品中依次加入复合物A、复合物B、燃料链，再加入DNA核酸酶酶链和DNA核酸酶底物链，进行酶切反应；

（3）检测底物链浓度和荧光强度，计算得到待测样品中的双酚A含量；

其中，所述核酸适配体靶向结合催化链或双酚A中的任意一个；

所述催化链靶向结合所述核酸适配体或所述复合物B中的任意一个；

所述核酸适配体的核苷酸序列为：5'-CCGGTGGGTGGTCAGGTGGGATAGCGTTCCGCGTATGGCCCAGCGCATCACGGGTTCGCACCA-3'（SEQ ID NO.1）；

所述催化链的核苷酸序列为：5'-CCATACGCGGAACGCTATCCCA-3'（SEQ ID NO.2）；

所述引发链包括引发链1和引发链2；

所述引发链1的核苷酸序列为：5'-CCACATACATCATATTCCCTCCATACGCGGAACGCT-3'（SEQID NO.3）；

所述引发链2的核苷酸序列为：5'-CTTTCCTACACCTACGTCTCCAACTAACTTACGG-3'（SEQ IDNO.4）；

所述引发链均靶向结合所述辅助链或所述底物链中的任意一个；

所述辅助链的核苷酸序列为：5'-TGGGATAGCGTTCCGCGTATGGAGGGCCGTAAGTTAGTTGGAGACGTAGG-3'(SEQ ID NO.5)；

所述燃料链的核苷酸序列为：5'-CCTACGTCTCCAACTAACTTACGGCCCTCCATACGCGGAACGCT-3'（SEQ ID NO.6）。

2.根据权利要求1所述的免标记荧光检测方法，其特征在于，所述DNA核酸酶底物链含有对应所述DNA核酸酶酶链的酶切位点和分别位于酶切位点两侧的荧光基团和猝灭基团。

3.根据权利要求1所述的免标记荧光检测方法，其特征在于，所述DNA核酸酶酶链包括镁离子依赖性DNA核酸酶酶链，所述镁离子依赖性DNA核酸酶酶链的核苷酸序列为：

5'-TATGGAGGGAACT-Dabcyl-rAGGT-FAM-CTGTAGGAAAG-3'。

4.根据权利要求1所述的免标记荧光检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述核酸适配体和催化链的混合浓度比为（1~10）：1。