[发明专利]一种快速检测乙醇的电极系统及使用电极系统对乙醇检测的方法

权利要求书

1.一种快速检测乙醇的电极系统，其特征在于，该电极系统包括直接酶电极和辅助酶电极，在乙醇测定时，直接酶电极与辅助酶电极同时使用；

所述直接酶电极的制备方法，如下：

(1)制备电极探头Ⅰ：使用绝缘材料将工作块和参比块集成为整体，形成柱状电极探头Ⅰ，备用；

(2)电极探头Ⅰ的修饰：在步骤(1)获得的电极探头Ⅰ表面采用超声纳米雾化喷涂方式包覆纳米氧化石墨烯层，然后室温真空干燥，完成电极探头Ⅰ修饰；

(3)电极探头Ⅰ的固定化：将步骤(2)修饰后的电极探头Ⅰ置于超净台，取5-10U乙醇氧化酶、4％血红蛋白5-10μl、30％甘油1-3μl、混匀，静置2-5min，获得溶液A；然后向溶液A中加入2％戊二醛2-6μl，涡旋混匀10-25秒，获得溶液B，取溶液B 5-20μl在1min之内喷涂于修饰后的电极探头Ⅰ表面，室温静置固化30-60min，完成电极探头Ⅰ的固定化，使电极探头Ⅰ表面固定化乙醇氧化酶层；

(4)直接酶电极制备：取0.1-1.0％壳聚糖水凝胶溶液，滴涂在步骤(3)固定化后的电极探头Ⅰ表面，冷冻干燥，得直接酶电极；

所述辅助酶电极的制备方法，如下：

S1，制备电极探头Ⅱ：采用直接酶电极制备方法中步骤(1)的方法制备柱状电极探头Ⅱ，待用；

S2，电极探头Ⅱ固定化：制备与直接酶电极步骤(3)相同的混合A，在80℃温度下加热灭活，然后向灭活后的混合A中加入2％戊二醛2-6μl，涡旋混匀10-25秒，获得溶液C，取溶液C5-20μl在1min之内喷涂于电极探头Ⅱ的表面，室温静置固化30-60min，完成电极探头Ⅱ的固定化，使电极探头Ⅱ表面固定化氧化酶层；

S3，辅助酶电极制备：取0.1-1.0％壳聚糖水凝胶溶液，滴涂在步骤S2固定化后的电极探头Ⅱ表面，冷冻干燥，得辅助酶电极。

2.如权利要求1所述的快速检测乙醇的电极系统，其特征在于，在步骤(1)和S1中，工作块为铂(Pt)电极，作为正极使用；参比块为银片，作为负极使用；铂电极的表面积为0.6mm²，银电极表面积19mm²。

3.如权利要求1所述的快速检测乙醇的电极系统，其特征在于，在步骤(2)中，超声纳米雾化喷涂过程为：将氧化石墨烯水溶胶采用超声波清洗机超声分散10-40min后，进行超声波纳米雾化喷涂；超声纳米雾化喷涂过程中的控制参数为：超声频率范围90-140kHz，喷涂宽幅1-50mm，喷涂流量0.001-1ml/min；喷涂时间1-10min。

4.如权利要求3所述的快速检测乙醇的电极系统，其特征在于，超声纳米雾化喷涂过程中的控制参数为：超声频率120kHz，喷涂宽幅为25mm，喷涂流量为0.002ml/min，喷涂时间为1.5min。

5.如权利要求1所述的快速检测乙醇的电极系统，其特征在于，在步骤(3)中，取7U乙醇氧化酶、4％血红蛋白5μl、30％甘油3μl、混匀，静置3min，获得溶液A；然后向溶液A中加入2％戊二醛5.5μl，涡旋混匀25秒，获得溶液B；取18μl溶液B在步骤(2)修饰后的电极探头Ⅰ表面直接进行均匀涂布，室温静置固化45min。

6.如权利要求1所述的快速检测乙醇的电极系统，其特征在于，在步骤(4)和S3中，壳聚糖水凝胶溶液制备过程为：使用1％乙酸溶液作为溶剂，对壳聚糖进行稀释，获得0.5％壳聚糖水水凝胶，壳聚糖水凝胶的pH为6.0；滴涂后，冷冻干燥45min。