[发明专利]一种鲑科鱼发眼卵的活性检测试剂、方法及应用

说明书

本申请公开了一种鲑科鱼发眼卵的活性检测试剂、方法及应用。本申请的活性检测试剂包括第一引物探针组和/或第二引物探针组中的至少一组；第一引物探针组的上下游引物和探针分别为Seq ID No.1、2和3所示序列；第二引物探针组的上下游引物和探针分别为Seq ID No.4、5和6所示序列；两个探针5’端具有相同或不同的荧光基团，3’具有荧光淬灭基团。本申请的试剂和方法，只需对待测鲑科鱼发眼卵的核酸进行实时荧光PCR，即可检测鲑科鱼发眼卵的活性；相比于形态学鉴定，本申请的试剂和方法，能更准确的判断鱼卵活性。本申请的试剂和方法为鲑科鱼发眼卵活性检测提供了一种新方案和途径，对鲑科鱼养殖生产具有重要意义。

技术领域

本申请涉及鱼卵活性检测技术领域，特别是涉及一种鲑科鱼发眼卵的活性 检测试剂、方法及应用。

背景技术

鲑科鱼类是大、中型的冷水鱼类，共有15属67种。根据2010年的统计数 据，全球鲑科鱼养殖品种主要涉及5属13种，养殖产量达到240万吨以上，且 每年稳步上升。其中大西洋鲑(Salmo salar)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)是 最主要的种类，分别占总产量的61.7％和29.6％。

大西洋鲑(S.salar)俗称“三文鱼”，属于鲑科(Salmonidae)鲑属(Salmo)。 自然栖息地是大西洋北部，即北美东北部、欧洲的斯堪的纳维亚半岛沿岸，是 一种营养价值高的养殖鱼类。挪威、智利、加拿大、法罗群岛及俄罗斯等都是 大西洋鲑的主要养殖地。

虹鳟（O.mykiss）属于鲑科（Salmonidae）太平洋鲑属（Oncorhynchus）。自然栖息地是北美洲的太平洋沿岸及堪察加半岛一带。美国、日本、丹麦等是虹鳟主要的养殖地。

鲑科鱼发眼卵的卵径多为4.2～6.5mm，重70～120mg，颜色为橘红色至鲜红 色，可见两淡黑色眼点。质量较好的鱼卵一般卵径较大，大小均匀，色泽鲜亮。 鲑科鱼发眼卵对高温敏感，一般最适合的孵化温度为7-13℃。鲑鱼卵的发育情 况常用积温来表示，即温度×天数，积温达到一定数量才会孵化；因此，在孵化 温度合适的前提下，温度越高，时间越短。但是，温度过高又会引起鲑科鱼发 眼卵的活性下降，甚至死亡。

鲑科鱼发眼卵在长期运输过程中，保证低温是重要的环节，因为即使是室 温25℃，对于鲑科鱼卵也是热激温度，易引起活性的下降和死亡的增加。目前， 国内外关于鲑科鱼卵活性的研究较少。现有普遍采用的鲑科鱼卵检测主要是形 态学鉴定，通过观察鱼卵的色泽、大小、状态等判断鱼卵的活性。形态学鉴定 存在很强的主观性，对检测人员的技术和经验要求也较高；因此，亟需研发一 种更加有效的鲑科鱼发眼卵活性检测方案，以满足日益增长的鲑科鱼养殖和生 产需求。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的鲑科鱼发眼卵的活性检测试剂、方法及应用。

本申请采用了以下技术方案：

本申请的一方面公开了一种鲑科鱼发眼卵的活性检测试剂，其包括第一引 物探针组和/或第二引物探针组；第一引物探针组的上下游引物分别为Seq ID No.1和Seq IDNo.2所示序列，探针为Seq ID No.3所示序列；第二引物探针组 的上下游引物分别为SeqID No.4和Seq ID No.5所示序列，探针为Seq ID No.6 所示序列；

Seq ID No.1：5’-GAGGTCAGCGACCCAAAGAC-3’

Seq ID No.2：5’-GCCGTAGAGGCGGTTACTGAT-3’

Seq ID No.3：5’-CGGAACGTCACATGGA-3’

Seq ID No.4：5’-TTGGATGACCCTCAGACACACT-3’