[发明专利]一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法及其应用有效
| 申请号： | 202011359691.6 | 申请日： | 2020-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN112608939B | 公开（公告）日： | 2022-05-31 |
| 发明（设计）人： | 王玉龙;于鹏程;余发星 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人： | 郎祺 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 条件 mtert 表达 小鼠 模型 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，通过无缝克隆的技术构建打靶载体，所述打靶载体包含3.3kb 5'同源臂、CAG启动子、loxp-stop-loxp、TERT-3XFlag-IRES-EGFP-WPRE-polyA和3.3kb 3'同源臂；
步骤二，将Cas9 mRNA、gRNA和所述打靶载体显微注射到野生型小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠，并鉴定出同源重组阳性F0代小鼠，回交后获得F1代小鼠，即为条件性mTERT过表达的小鼠模型；
所述gRNA的序列为SEQ ID NO.:1。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤二中所述鉴定采用的技术是长片段PCR技术。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述长片段PCR技术采用的引物序列为SEQ ID NO.:2～SEQ ID NO.:5。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述长片段PCR技术采用的反应体系包括ddH2O、PrimeStar GXL PCR Buffer、dNTP、引物和基因组DNA，其中引物的浓度为20pmol/μl。
5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述长片段PCR技术的反应程序为：
。
6.如权利要求1-5任一项所述的构建方法在不同组织器官中特异性过表达mTERT中的应用，其特征在于，将所述构建方法构建的小鼠模型与对应的Cre小鼠交配。
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