[发明专利]一种硫酸酯-季铵盐壳聚糖纳米粒作为载体的应用

说明书

本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及一种硫酸酯壳聚糖‑季铵盐壳聚糖纳米粒在作为载体的应用。硫酸酯壳聚糖‑季铵盐壳聚糖纳米粒在作为牛血清白蛋白(BSA)免疫载体的应用。通过细胞免疫实验证实其具有一定免疫效果，激光共聚焦测定表明细胞对纳米粒具有一定摄取作用，从而发挥免疫效果。为近年来壳聚糖衍生物作为抗原及药物载体的研究提供一定的方法和指导。

技术领域

本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及一种硫酸酯壳聚糖-季铵盐壳聚糖纳米粒在作为载体的应用。

背景技术

纳米技术的研究是近年来研究热点之一，利用纳米粒作为药物载体是目前医学上多种药物的重要研究方向。但是，作为药物及疫苗的抗原，很大一部分是由蛋白组成，不同蛋白的分子量，等电点以及所带电性和电荷都有所不同，并不是所有的蛋白都能够被同一个纳米粒所负载，且其负载条件也有较大差异性。蛋白能否与载体通过电荷发生复合接或者化学键偶连从而被负载到载体上，对于载体材料十分重要。因此有必要研究载体材料对于蛋白的负载情况以及负载后活性。从而说明其作为载体的特异性。

发明内容

本发明考虑以上问题，提供一种壳聚糖硫酸酯-季铵盐壳聚糖纳米粒在作为载体的应用。

为实现上述目的，本实验采用的技术方案为：

一种壳聚糖纳米粒作为载体的应用，硫酸酯壳聚糖-季铵盐壳聚糖纳米粒在作为牛血清白蛋白(BSA)载体的应用。

所述纳米粒与牛血清白蛋白(BSA)按照质量比位0.5-2:1的比例混合。

所述纳米粒为通过不同取代位点的壳聚糖负电荷衍生物和壳聚糖正电荷衍生物，以聚电解质复合法获得粒径135.70nm-255.00nm、电位16.00mV-38.40mV的包裹抗原的壳聚糖衍生物纳米粒；所述正电荷和负电荷衍生物按质量比为6.25-10：1-4的比例混合。

所述不同取代位点的壳聚糖负电荷衍生物为不同取代位点的壳聚糖硫酸酯化衍生物；壳聚糖正电荷衍生物为壳聚糖季铵化衍生物；其中，所述的硫酸酯壳聚糖为C2,3,6-位、C6-位、C3,6-位、C3-位、C2-位、C2,3-位或C2,6-位的硫酸酯壳聚糖，且其分子量为200kDa；所述季铵盐壳聚糖为2、3-环氧丙基三甲基氯化铵壳聚糖衍生物，其分子量为200kDa。

所述的硫酸酯壳聚糖为C2,3,6-位、C6-位、C3,6-位的硫酸酯壳聚糖，且其分子量为200kDa；所述季铵盐壳聚糖为2、3-环氧丙基三甲基氯化铵壳聚糖衍生物，其分子量为200kDa。

所述两种壳聚糖衍生物在室温，以500r-700r/min磁力搅拌20-40min,过滤后得到纳米粒溶液，4℃保存。

所述两种壳聚糖衍生物之间的用量为：壳聚糖负电荷衍生物：壳聚糖正电荷衍生物质量比为3:5。

将带正电的季铵盐壳聚糖与牛血清白蛋白(BSA)混合均匀后，加入带负电的硫酸酯壳聚糖，通过静电吸附作用使牛血清白蛋白(BSA)负载于纳米粒。

所述包裹抗原的载体对于DCS细胞具有较好的免疫活性，能够促进细胞因子表达量的提高且能够被细胞摄取，硫酸酯壳聚糖-季铵盐壳聚糖纳米粒具有作为抗原载体的特征。

进一步的说，利用所述硫酸酯壳聚糖-季铵盐壳聚糖纳米粒，采用对DCS细胞的免疫活性进行测定。通过对未包裹抗原纳米粒的细胞毒性测定，确定其对细胞无毒的纳米粒最大浓度为100μg/mL，而包裹抗原后纳米粒，其对细胞无毒的纳米粒最大浓度也为100μg/mL，表明包裹抗原后，纳米粒对细胞毒性变化不大，因此在无毒浓度下，通过对免疫因子表达量的测定，确定制备纳米粒条件为硫酸酯壳聚糖浓度为1.5mg/mL，季铵盐壳聚糖浓度为1.0mg/mL，纳米粒具有最好的免疫效果。而后通过共聚焦显微镜照片拍摄，表明纳米粒负载抗原后，随着时间增加包裹抗原的纳米粒被细胞摄取量也增加。表明所制备纳米粒具有作为抗原载体潜力。