[发明专利]一种灭蝇胺单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种灭蝇胺单克隆抗体及其应用，该抗体包括轻链可变区和重链可变区，轻链可变区的CDR1序列如SEQ ID NO：1所示、CDR2序列如SEQ ID NO：2所示、CDR3序列如SEQ ID NO：3所示；重链可变区的CDR1序列如SEQ ID NO：4所示、CDR2序列如SEQ ID NO：5所示、CDR3序列如SEQ ID NO：6所示。该抗体对灭蝇胺具有较好的检测灵敏度和添加回收率，可实现对农产品中灭蝇胺残留量的检测，为灭蝇胺残留量的免疫检测提供了原料。并且首次测得该抗体的可变区基因序列，为后续抗体试剂应用于检测试剂盒时采用规模化表达生产提供了序列基础。

技术领域

本发明属于农药残留免疫分析技术领域，具体涉及一种灭蝇胺单克隆抗体及其应用。

背景技术

灭蝇胺 (Cyromazine)是一种昆虫生长调节剂类低毒杀虫剂，有非常强的选择性，主要对双翅目昆虫有活性。其作用机理是使双翅目昆虫幼虫和蛹在形态上发生畸变，成虫羽化不全或受抑制。该药具有触杀和胃毒作用，并有强内吸传导性，持效期较长，但作用速度较慢。然而，灭蝇胺的残留也会使一些不是预定目标的生物遭到毒害。

目前，对灭蝇胺残留的检测方法主要是仪器分析方法，包括气相色谱法(Gaschromatography，GC)、气相色谱-质谱串联法(GC-MS)等。这些方法结果可靠，灵敏度高，已有相关的技术标准可供参考。但由于需要昂贵的仪器、专门的操作人员，以及样品前处理复杂、成本高、时间长，因此不能更好地满足快速简便的现场检测要求。

与仪器分析方法相比，免疫检测方法因其简便、经济、快速等优点而在农药残留检测领域中受到越来越多的关注。ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法是常用的免疫检测方法，但是其却有操作步骤相对较多，检测时间较长，检测结果不够直观，不能在线进行检测等缺陷。因而ELISA在灭蝇胺的快速检测上的应用受到很大的限制。胶体金试纸条无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟即可判定结果，不仅操作简便、快速，且结果直观准确、成本低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灭蝇胺单克隆抗体及其应用，该抗体对灭蝇胺具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立灭蝇胺的免疫学检测方法。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种抗灭蝇胺的单克隆抗体，包括轻链可变区和重链可变区，其中，

所述轻链可变区的CDR1序列如SEQ ID NO：1所示；

所述轻链可变区的CDR2序列如SEQ ID NO：2所示；

所述轻链可变区的CDR3序列如SEQ ID NO：3所示；

所述重链可变区的CDR1序列如SEQ ID NO：4所示；

所述重链可变区的CDR2序列如SEQ ID NO：5所示；

所述重链可变区的CDR3序列如SEQ ID NO：6所示。

以上所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

本发明所述的单克隆抗体在制备灭蝇胺免疫检测产品中的应用。

抗灭蝇胺单克隆抗体的制备步骤为：

（1）免疫原的制备：以灭蝇胺为原料，KLH为载体蛋白，利用活泼酯法制备免疫原，包被原是采用同样的方法与BSA 偶联，反应结束后，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原，通过紫外吸收扫描方法鉴定；

（2）小鼠的免疫：将免疫原与福氏佐剂乳化完全后，通过皮下多点注射免疫BALB/c小鼠；首次免疫采用福氏完全佐剂，加强免疫使用福氏不完全佐剂，冲刺免疫时免疫剂量为前一次免疫剂量的一半，与生理盐水混合均匀后直接进行腹腔注射；各次免疫间隔为三周；第三次免疫后，间隔一周采血检测血清效价和抑制；