[发明专利]一种可鉴定大麦籽粒糯性的KASP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种引物组合物，其特征在于：分别延长SNP G³⁹³⁵前后至少40bp碱基序列后获得。

2.一种引物组合物，其特征在于：包括正向引物AL1，其序列如SEQ ID NO.3所示；正向引物AL2，其序列如SEQ ID NO.4所示；反向引物C，其序列如SEQ ID NO.5所示。

3.权利要求1或2所述引物组合物在鉴定、检测、筛选大麦籽粒糯性及培育糯性大麦品种中的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于：以待测样品的基因组DNA为模板，利用所述引物组合物对模板进行荧光定量PCR扩增，利用扩增结果进行基因型分型。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于：在各引物的5’端分别添加不同的标记基团，可识别出正向引物AL2标记的标记基团的待测样品为糯性大麦。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于：所述标记基团为荧光修饰基团。

7.根据权利要求4所述应用，其特征在于：包括如下步骤：

(1)提取待测大麦样品DNA；

(2)取浓度为50～100ng/μL的模板DNA 1.0μL、引物混合液0.7μL、KASP Master Mix5.0μL、超纯水加至总量为10μL，进行PCR扩增反应；所述引物混合液为正向引物AL1、正向引物AL2、反向引物C的混合溶液；

PCR扩增反应条件为：95℃预变性15分钟；第一步扩增反应：95℃变性20秒，65℃梯度退火并延伸60秒，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.7℃；第二步扩增反应，94℃变性20秒，57℃退火并延伸60秒，30个循环；12℃保存。

(3)分析PCR扩增产物基因型；检测出等位位点T³⁹³⁵的样品为携有糯性等位类型植株。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于：引物混合液的制备方法为：将浓度均为10μM的正向引物AL1、正向引物AL2、反向引物C按体积比为3：3：8的比例混合。

9.一种含有权利要求1或2所述引物组合物的产品，其特征在于：用于大麦籽粒糯性的鉴定、检测、筛选，或用于培育糯性大麦品种。

10.根据权利要求9所述产品，其特征在于：所述产品为试剂盒。