[发明专利]一种诱导香蕉理想突变密度的诱变方法

说明书

本发明提供一种诱导香蕉理想突变密度的诱变方法，包括以下步骤：EMS诱变剂的配制、香蕉的处理、洗涤处理、增殖培养、辐射处理，本发明经科学配制诱变剂，在MS培养基的基础上，添加6‑苄基氨基嘌呤(BAP)、腺嘌呤，相互协调使用，调节诱变剂配比，再经特定的诱变方法，调节诱变剂培养和增殖培养基培养环境，使用He‑Ne激光辐射处理，在低温下用低浓度长时间处理，刺激植物生长，促进不定芽对培养基的吸收，高效识别突变基因，从基因组中的中等到高的突变密度，减少实现基因组覆盖所需的突变，提高香蕉的诱变效率，有效增加变异类型。

技术领域

本发明涉及植物多倍体诱变育技术种植领域，特别涉及一种诱导香蕉理想突变密度的诱变方法。

背景技术

香蕉是典型的热带亚热带果树，广泛分布于热带和南亚热带地区。我国是世界香蕉主产国之一，种植区域分布于广东、海南、广西、福建、云南及台湾等省区。目前，香蕉植物体构建突变体传统方法是自发突变和理化诱变，但自发突变的频率较低，很难进行系统收集，物理诱变易获突变，且多为多点突变，但由于无法控制点突变的数量，增加功能基因的难度，而大多使用高浓度的化学诱变剂对植株进行诱变，对植物体来说生理损伤也相对地增高,，往往影响植株的成活率。

本发明旨在高效识别突变基因，从基因组中的中等到高的突变密度，减少实现基因组覆盖所需的突变，提高香蕉的诱变效率，有效增加变异类型。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种诱导香蕉理想突变密度的诱变方法，解决上述问题。

本发明的技术方案是这样实现的：一种诱导香蕉理想突变密度的诱变方法：包括以下步骤：

S1、EMS诱变剂的配制：MS培养基、6-苄基氨基嘌呤(BAP)1.0～5.0mg/L、腺嘌呤0.2～1.5mg/L、琼脂糖2.0～4.0g/L、蔗糖20～40g/L；

S2、香蕉的处理：使用手术刀切割下单个独立的芽，放入上述EMS诱变剂的三角瓶中，在旋转摇床中以100～150rpm、20～30℃振荡浸泡培养4～24h，

S3、洗涤处理：上述步骤处理后，在蒸馏水中冲洗2～5次茎尖；

S4、增殖培养：每隔20～30天将诱变后的不定芽转接到增殖培养基中，进行4～8个循环后，转入含有0.5～3.0g/L吲哚丁酸IBA、2.0～4.0g/L琼脂糖和20～40g/L蔗糖的MS基础培养基中；

S5、辐射处理：将S4处理中的不定芽经He-Ne激光辐射处理，波长为700～900nm，获得诱变处理植物体。

进一步的，所述S1中的蔗糖pH为4.0～6.0。

进一步的，所述S1中EMS诱变剂的配制：MS培养基、6-苄基氨基嘌呤(BAP)3.0mg/L、腺嘌呤1.0mg/L、琼脂糖3.0g/L、蔗糖30g/L。

进一步的，所述S1中EMS诱变剂浓度0.4～1.6％。

进一步的，所述S2步骤中旋转摇床的转速为120rpm，恒温27℃荡浸泡培养。

进一步的，所述S4步骤的增殖培养基为1.0g/L吲哚丁酸IBA、3.0g/L琼脂糖和30g/L蔗糖的MS基础培养基。

进一步的，所述S5步骤中的不定芽吸收剂量为30～50Gy。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：