[发明专利]一种低速离心纯化重组木聚糖酶的方法有效
| 申请号： | 202011367038.4 | 申请日： | 2020-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN112342207B | 公开（公告）日： | 2022-09-30 |
| 发明（设计）人： | 张光亚;葛钟琪;葛慧华 | 申请（专利权）人： | 华侨大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/70;C12N15/56;C12N15/12;C07K14/47 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 张松亭;姜谧 |
| 地址： | 362000 福建省*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 低速 离心 纯化 重组 聚糖 方法 | ||
1.一种低速离心纯化重组木聚糖酶的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将依次相连的木聚糖酶的基因片段和铁蛋白的基因片段插入pET-22b(+)质粒载体中，构建形成pET-Xyl-Ferritin，其中，木聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.01所示，铁蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.02所示；
(2)将步骤(1)所得的pET-Xyl-Ferritin转入大肠杆菌中，制成工程菌；
(3)将步骤(2)所得的工程菌在LB培养基中活化后，于TB培养基中扩大培养，再加入IPTG诱导表达，获得培养液；
(4)将步骤(3)所得的培养液经离心后，获得第一沉淀，再加入PBS重悬洗涤，获得菌体；
(5)将步骤(4)所得的菌体进行超声破碎；
(6)将步骤(5)所得的物料于pH＝7-8且10-35℃的条件下静置10-30min；
(7)将步骤(6)所得的物料于500-2800g离心5-15min，获得第二沉淀，即成。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述木聚糖酶的基因片段的序列如SEQ IDNO.03所示。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述铁蛋白的基因片段的序列如SEQ IDNO.04所示。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述木聚糖酶的基因片段的序列如SEQ IDNO.03所示，所述铁蛋白的基因片段的序列如SEQ ID NO.04所示。
5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为E.coilBL21(DE3)。
6.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)的活化为培养至OD600＝0.6-1.0。
7.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)的扩大培养的温度为37℃，200rpm摇床培养3-4h，接种量为1∶100。
8.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述超声破碎的条件为：超声2s，停2s，如此循环80次。
9.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤(6)为：将步骤(5)所得的物料于pH＝7.5且35℃的条件下静置20min。
10.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤(7)为：将步骤(6)所得的物料于2000g离心5min，获得第二沉淀，即成。
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