[发明专利]一种验证水稻粒形和粒重的QTL的方法

权利要求书

1.一种验证水稻粒形和粒重的QTL的方法，其特征在于，包括以下验证步骤：

步骤一：准备材料

渗入系IL188来源于粳稻品种日本晴和从国际水稻研究所(IRRI)种质资源中心收集的小粒野生稻W303之间的种间杂交，再以日本晴为轮回亲本回交三代，并借助胚拯救技术，随后自交四代，由母本IL188和父本日本晴之间杂交的F₁自交构建由166个株系组成的F₂群体，F_2:3群体来源于F₂各株系自交获得；

步骤二：根据QTL分析的初步结果，利用分子标记从F_2:3群体中筛选4个剩余杂合体，顺序杂合片段分布在RM500–RM429区间；自交构建4个NIL-F₂群体：共180株、184株、184株和195株，分别命名为R1、R2、R3和R4群体；

步骤三：从连续杂合区段为Y7-3–Y7-4的R3群体中进一步筛选4个单株；自交构建4个NIL-F₂群体：共有130株、144株、146株和140株，分别命名为R5、R6、R7和R8群体；然后在R6和R8群体中进一步鉴定非重组纯合植株并进行自交，再建立两组NILs，每组由20个IL188纯合基因型株系和20个日本晴纯合基因型株系组成；

步骤四：F₂和F_2:3群体于2014年夏、冬季分别在中国水稻研究所杭州试验基地(N 30°32′，E 120°12′)和中国水稻研究所海南陵水试验基地(N 18°48′，E 110°02′)种植；NIL-F₂群体和两套NILs分别于2015年、2016年和2017年夏季在中国水稻研究所杭州实验基地种植；F₂和NIL-F₂群体的植株间距为20cm，行间距为30cm；F_2:3群体和2套NILs采用完全随机区组设计，重复两次，每小区5行，每行8株，每行株间距20cm，行间距30cm；田间管理方式按照常规栽培要求实施；

步骤五：粒形性状评价

对于F₂群体和NIL-F₂群体，单株收获进行性状评价，对于F_2:3群体、NILs-qGL7^Nip和NILs-qGL7^IL188，每个株系收获10株进行性状评价，并在每个群体中对5个粒形性状进行评价；对于粒长、粒宽和粒厚，随机选择20粒饱满的稻谷，用电子数显游标卡尺单独测量，并取20粒的平均值用于数据分析。千粒重通过从每个F₂单株随机选择200粒饱满的籽粒称重来进行评估；F_2:3群体、NIL-F₂群体和NIL的表型评价与上述F₂植株的表型评价相同；

步骤六：用扫描电镜观察NIL-qGL7^Nip和NIL-qGL7^IL188在成熟期的小穗

将样品在FAA溶液中4℃固定24h，然后用乙醇分级脱水，用临界点干燥法进行干燥，最后样品在扫描电镜下观察，并应用image J软件测定小穗表皮细胞大小；

步骤七：DNA提取和分子标记分析

采用CTAB法从新鲜叶片样本中提取DNA，利用512个具有良好基因组覆盖率的SSR标记来检测亲本W303和日本晴之间的多态性，其中分布在12条染色体上的185个标记在两个亲本之间具有多态性；再利用IL188和日本晴之间的30个多态性标记对F₂和F_2:3群体进行基因型分析，进一步利用16个SSR和InDel标记用于精细定位；

步骤八：连锁图谱的构建及数据分析

利用MAPMAKER/EXP version 3.0构建遗传连锁图谱，利用Kosambi映射函数将重组频率转换为cM，使用Windows QTL Cartographer 2.5进行复合区间作图分析，以LOD阈值为2.5检测可能存在的QTL；并对QTL进行命名，利用t测验比较IL188和日本晴以及NIL群体中两个纯合基因型之间的表型差异，采用SPSS软件进行粒形性状的相关分析。

步骤九：最后得出鉴定结果。

2.根据权利要求1所述的一种验证水稻粒形和粒重的QTL的方法，其特征在于：在步骤六中，溶液配比为福尔马林:冰醋酸:乙醇，体积比1:1:18。