[发明专利]云烟87的DNA指纹图谱及其应用

权利要求书

1.云烟87的DNA指纹图谱在鉴定云烟87中的应用，所述DNA指纹图谱包括101个SNP位点，所述SNP位点及该处的特异性核苷酸如下：

。

2.云烟87的鉴定方法，所述鉴定方法包括以下步骤：

检测待测烟草的基因组DNA中101个SNP位点处的核苷酸，并与云烟87的DNA指纹图谱中对应的101个SNP位点处的特异性核苷酸相比较，符合率≥95%时将待测烟草鉴定为云烟87，其中所述101个SNP位点以及云烟87的DNA指纹图谱中对应的101个SNP位点处的特异性核苷酸如下：

。

3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，从待测烟草的新鲜烟叶中获得所述基因组DNA。

4.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括以下步骤：

(1)从待测烟草的组织样品中提取基因组DNA，以限制性内切酶SacI和MseI对基因组DNA进行酶切；

(2)将步骤(1)得到的酶切片段与测序接头相连接后纯化，选择长度在320-420bp范围内的片段，富集扩增并测序，其中采用Illumina NovaSeq测序系统，原始测序读长为Paired-end 150bp，测序数据为FASTQ格式；

(3)将步骤(2)得到的对应于权利要求2中101个SNP位点处的核苷酸与权利要求2中限定的云烟87的DNA指纹图谱中对应的101个SNP位点处的特异性核苷酸相比较，符合率≥95%时将待测烟草鉴定为云烟87。

5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述组织样品为新鲜烟叶。

6.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中，酶切体系为：

试剂 用量

DNA，≥40ng/μl 20μl

MseⅠ，10000U/ml 0.15μl

SacⅠ，10000U/ml 0.15μl

10* 缓冲液 3μl

水 加至30μl

总体积 30μl

37℃温育4h以上。