[发明专利]从千层塔提取物中分离总生物碱的方法

权利要求书

1.一种从千层塔提取物中分离总生物碱的方法，包括以下步骤：

（1）溶解：将千层塔提取物用有机溶剂1溶解，过滤，得提取液，所述有机溶剂1为二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯；

（2）反萃取：用含有表面活性剂的酸水反萃取提取液，合并酸水层；所述的酸选自盐酸、硫酸或磷酸，所述酸水的质量百分比浓度为1.5～3%，反萃取进行两次以上，每次反萃取使用的酸水用量为千层塔提取物重量的30-60倍，单位L/kg；所述表面活性剂在酸水中的重量百分比为0.02～0.05%，所述表面活性剂为阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂按照质量比1～2：1～2的复配，所述阳离子表面活性剂选自十四烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵中的至少一种；所述非离子表面活性剂选自烷基酚聚氧乙烯醚，脂肪酸聚氧乙烯酯中的至少一种；

（3）脱色、过滤、浓缩：往酸水层加入吸附脱色剂，搅拌脱色，粗过滤，再用纳滤膜过滤，滤液减压浓缩后用碱液调节pH值至碱性；所述纳滤膜的截留分子量为300～500Da；

（4）萃取：用有机溶剂2萃取步骤（3）中的碱性浓缩液，合并有机层，水洗至中性待用，所述有机溶剂2为二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯；

（5）硅胶层析：将步骤（4）中的有机层通过硅胶层析柱，收集硅胶层析柱流出液，浓缩，干燥，得千层塔总生物碱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，有机溶剂1的用量为千层塔提取物重量的10～30倍，单位L/kg；步骤（4）中，有机溶剂2萃取步骤（3）中的碱性浓缩液进行两次以上，每次萃取使用的有机溶剂2用量依次为千层塔提取物重量的20-30倍，单位L/kg。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的吸附脱色剂为硅藻土、活性白土或活性炭，吸附脱色剂的用量为千层塔提取物重量的5%～10%；所述纳滤的压力为0.3～0.5 Mpa。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述搅拌脱色的时间为1～3小时，所述减压浓缩的温度为60～70℃，真空度为-0.08～-0.09 Mpa，所述的碱液为氢氧化钠或氢氧化钾水溶液，所述调碱后的pH值为9～12。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（5）中，所述的硅胶为柱层析硅胶，硅胶的用量为千层塔提取物重量的8～10倍，单位L/kg，所述硅胶层析柱的高径比为6～8：1，所述有机层通过硅胶层析柱的流速为0.5～0.8BV/小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(5)硅胶层析得到千层塔总生物碱之后，还进行步骤(6)：采用梯度洗脱的方式，流动相I为乙腈-水混合溶剂，其中乙腈体积分数为12-15%，流动相II为乙腈-水-醋酸混合溶剂，乙腈-体积占比为17-25%，醋酸体积占比1-3%；高压制备液相色谱分离6β-羟基石杉碱甲、石杉碱甲和石杉碱乙：先将千层塔总生物碱用流动相溶解、稀释，再注入高压制备液相色谱柱，最后用流动相洗脱；收集不同时间段的洗脱液馏分，分别浓缩、干燥，得高纯度6β-羟基石杉碱甲、石杉碱甲和石杉碱乙产品。