[发明专利]一种林麝香腺组织的三维重构方法

权利要求书

1.一种林麝香腺组织的三维重构方法，其特征在于：包括下述步骤：

(1)离体组织取样：在雄性林麝自然死亡后，立即取其香腺组织；

(2)固定：将步骤(1)得到的香腺组织立即浸入4％多聚甲醛溶液中避光保存24h以上，得到固定材料；

(3)脱水：取出步骤(2)中的固定材料，修整使切面平整，将切面修整平整后的固定材料依次在75％酒精中脱水4h、85％酒精中脱水2h、90％酒精中脱水2h、95％酒精中脱水1h、100％酒精Ⅰ中脱水30min、100％酒精Ⅱ中脱水30min，得到脱水材料；

(4)透明：将步骤(3)所得的脱水材料依次在无水乙醇和二甲苯的混合溶液中透明15-30min、二甲苯Ⅰ中透明15-30min、二甲苯Ⅱ中透明15-30min，得到透明材料；

(5)浸蜡包埋：将步骤(4)所得的透明材料依次在石蜡Ⅰ中浸蜡15-20min、石蜡Ⅱ中浸蜡30min-1h、石蜡Ⅲ中浸蜡30min-1h，然后包埋机包埋，得到蜡块；

(6)修块：将步骤(5)所得的蜡块外部不整齐的部分切去，使蜡块形状规则便于切片；

(7)切片：将步骤(6)中修整好的蜡块置于病理切片机上连续切片数张，切片厚度为4μm；

(8)摊片：将步骤(7)中所得切片漂浮于38-40℃温水表面展平，然后用防脱处理过的载玻片捞起；

(9)烤片及保存：将步骤(8)中捞起的切片放进60℃烘箱内烘烤，烘烤结束后室温保存；

(10)石蜡切片脱蜡至水：将经过步骤(9)处理后的切片依次放入二甲苯Ⅰ20min、二甲苯Ⅱ20min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、75％酒精5min，最后进行水洗；

(11)苏木素染色：将经过步骤(10)处理后的切片放入苏木素染液中染3-5min，然后水洗；接着放入分化液分化，然后水洗；最后返蓝液返蓝处理，流水冲洗；

(12)伊红染色：将经过步骤(11)处理后的切片依次放入85％酒精中脱水5min、95％酒精中脱水5min，然后放入伊红染液中染色5min；

(13)脱水封片：将经过步骤(12)处理后的切片依次放入无水乙醇I 5min、无水乙醇II5min、无水乙醇Ⅲ5min、二甲Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片；

(14)图像采集：将经过步骤(13)处理后的所有切片一一通过显微镜镜检切片是否平展无裂痕，进行图像采集分析，选择平展无裂痕的切片进行下一步骤；

(15)扫描：将经过步骤(14)筛选出的所有切片依次放在切片扫描仪的显微镜头下快速移动进行扫描成像并通过切片扫描仪的软件控制系统将每一张切片均无缝拼接生成一整张全视野的数字化切片，每一张切片均得到一张数字化切片，得到数张数字化切片；

(16)三维重建：将步骤(15)中扫描的全部数字化切片通过3DView软件堆扫描图片进行堆栈构成一个三维立体图。

2.根据权利要求1所述的林麝香腺组织的三维重构方法，其特征在于：所述步骤(7)中，连续切片的数量为150-1000张。

3.根据权利要求1所述的林麝香腺组织的三维重构方法，其特征在于：所述步骤(7)中，连续切片的数量为450-850张。

4.根据权利要求1所述的林麝香腺组织的三维重构方法，其特征在于：所述步骤(4)中，所述无水乙醇和二甲苯的混合溶液中，无水乙醇和二甲苯的体积比为1:1。

5.根据权利要求1所述的林麝香腺组织的三维重构方法，其特征在于：所述步骤(8)中，所述防脱处理为经过多聚赖氨酸处理。