[发明专利]人非小细胞肺癌核酸适配体截短体及其应用

说明书

本发明公开一种人非小细胞肺癌核酸适配体截短体，其是基于本发明在前期活体筛选获得的人非小细胞肺癌靶向及抑瘤双特异性核酸适配体的基础上，进一步简化了核酸适配体的序列，将原先含有83个核苷酸的序列进一步缩短到69个核苷酸，并且仍然保持了对人非小细胞肺癌极高的特异性及亲和力，以及对于肿瘤细胞增殖的抑制作用。本发明得到的人非小细胞肺癌核酸适配体截短体长度更短、分子量更小，其片段经过5’端PEG和NH₂修饰，其相较长链的RNA适配体相比，更易于进行大规模化学合成，成本低；同时拥有稳定性好，易于保存和修饰等优点。

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体地涉及人非小细胞肺癌核酸适配体截短体的序列。

背景技术

癌症已成为世界人口的主要死亡原因之一，据统计，全国每分钟就有7人死于癌症。其中肺癌是全世界及全国发病率和死亡率第一的恶性疾病。目前，手术切除及传统的化疗为临床常用的治疗手段，但是手术及化疗的高复发率和副作用一直是临床上亟待解决的问题，临床上迫切需要采取新的方法和手段治疗肺癌患者，提高患者的生存期，开发能特异性识别肿瘤组织而非正常组织的靶向诊断或治疗药物成为抗癌药物研发中的重中之重。

适配体(aptamer)是可以折叠成三维结构，通过空间构型与靶分子特异性结合的一段单链寡核苷酸序列(ssDNA，RNA或修饰后的RNA)。由于适配体具有与靶标结合的特异性，其中的一些适配体还可以通过与靶标的结合，抑制靶物质的功能，阻断细胞中的信号通路，具有被开发为特异性的抑制靶标的核酸药物的价值。

然而，传统的体内外筛选获得的适配体长度较长，不适合大规模的体外合成及修饰，因此，进一步优化核酸适配体序列长度，获得分子量小、易于合成和修饰，并且特异性、亲和力及生理功能俱佳的核酸适配体截短体，更有利于推动核酸适配体药物进入临床。

发明内容

发明目的：为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提出一种序列更短、分子量子量更小的人非小细胞肺癌核酸适配体截短体。

本发明在前期活体-SELEX获得的人非小细胞肺癌特异性适配体的基础上，进一步优化获得长度更短、分子量更小的核酸适配体截短体，获得的适配体截短体不仅仍然具有与人非小细胞肺癌H460细胞特异性结合的高亲和力，而且可以特异性地抑制人非小细胞肺癌细胞的增殖，有望实现肿瘤的靶向治疗。

具体地，所述核酸适配体截短体的核苷酸序列如SEQ NO.1所示: GGGAGAGAACAAUGACCUGCGGUGCCAAGCCGUCGGGUUAUGUUGAUCUCCU CAAGGACGAGUGCAUUG(SEQ NO.1)。

该截短体的获得，是基于本发明在前期活体筛选获得的人非小细胞肺癌靶向及抑瘤双特异性核酸适配体(详见CN106032534B)的基础上，进一步简化了核酸适配体的序列，将原先含有83个核苷酸的序列进一步缩短到69个核苷酸，并且仍然保持了对人非小细胞肺癌极高的特异性及亲和力，以及对于肿瘤细胞增殖的抑制作用。这不仅大大提高了寡核苷酸序列在体外化学合成的可能性及简便性，同时通过化学合成，有利于提高核酸序列的纯度和均一性，有利于大大缩短基于适配体的靶向核酸药物进入临床前试验期，提高临床应用的成功率。

进一步地，本发明对该核酸适配体截短体进行5’端PEG和NH₂修饰，其相较长链的RNA适配体相比，更易于进行大规模化学合成，成本低。

本发明进一步提出了上述核酸适配体截短体或修饰后的截短体在制备特异性诊断人非小细胞肺癌的诊断试剂上的应用。

具体地，本发明提出了一种特异性诊断人非小细胞肺癌的诊断试剂，所述的诊断试剂包括上述核酸适配体截短体和与之相连的可检测标记物。

所述的可检测标记物为荧光标记。

优选地，所述荧光标记为Cy3、Cy5、荧光素、FITC、荧光纳米微球、Alexa Fluor 染料中的任意一种。