[发明专利]一种共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子的制备方法，其特征在于，将共载阿霉素和吲哚菁绿的纳米颗粒置于PBS缓冲液中，在冰浴超声条件下滴加醛基化透明质酸溶液，反应0.5～24小时后经离心水洗后重悬于去离子水中，再在冰浴超声条件下滴加水溶性壳聚糖溶液，反应0.5～24小时后进行离心水洗、重悬于PBS缓冲液中，最后滴加带靶向配体的醛基化透明质酸溶液，反应0.5～24小时后离心水洗，得到共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子；

其中，共载阿霉素和吲哚菁绿的纳米颗粒通过以下过程制得：

(1)利用高碘酸钠氧化法合成氧化度为40％～100％的醛基化透明质酸，配制成溶液，然后滴加阿霉素水溶液，反应0.5～24小时后进行离心水洗，得到载阿霉素的透明质酸纳米粒；其中，阿霉素与醛基化透明质酸的质量比例为1：(1-10)；

(2)将水溶性壳聚糖溶于pH值为6.0～6.4的PBS缓冲液中制成水溶液，然后与吲哚菁绿溶液混合均匀，反应0.5～24小时后进行离心水洗，得到载吲哚菁绿的水溶性壳聚糖纳米粒；其中，吲哚菁绿与水溶性壳聚糖的质量比为1：(1-10)；

(3)共载阿霉素和吲哚菁绿的纳米颗粒的制备：将载阿霉素的透明质酸纳米粒悬于纯水中，得到溶液A，将载吲哚菁绿的水溶性壳聚糖纳米粒悬于pH值为6.0～6.4的PBS缓冲液中，得到溶液B，将溶液A与溶液B混合，经冰浴超声混合后反应0.5～24小时，离心水洗，得到共载阿霉素和吲哚菁绿的纳米颗粒；其中，载吲哚菁绿的水溶性壳聚糖纳米粒与载阿霉素的醛基化透明质酸纳米粒的质量比例为1：(2-10)。

2.根据权利要求1所述的一种共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子的制备方法，其特征在于，醛基化透明质酸溶液的浓度为1～10mg/mL，醛基化透明质酸溶液中醛基化透明质酸的氧化度为40％～100％；水溶性壳聚糖溶液的浓度为1～10mg/mL；水溶性壳聚糖溶液的pH值为6.0～6.4。

3.根据权利要求1所述的一种共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子的制备方法，其特征在于，带靶向配体的醛基化透明质酸溶液的浓度为1～10mg/mL；

醛基化透明质酸、水溶性壳聚糖或带靶向配体的醛基化透明质酸与载阿霉素和吲哚菁绿的纳米颗粒的质量比例均为(0.1～1)：1；

靶向配体为半乳糖胺、RGD肽或iRGD肽；

带靶向配体的醛基化透明质酸溶液中的醛基化透明质酸的氧化度为5％～20％。

4.根据权利要求1所述的一种共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子的制备方法，其特征在于，带靶向配体的醛基化透明质酸的制备方法是：按靶向配体和醛基化透明质酸上醛基物质的量比为1:(2～10)，将靶向配体加入到醛基化透明质酸溶液中，然后加入配体物质的量1.1～1.5倍量的氰基硼氢化钠，将配体上氨基与醛基形成的亚胺键还原成稳定的C-N键，经3000Da透析袋对水透析24～72小时后在零下20摄氏度进行冷冻干燥，得到带靶向配体的醛基化透明质酸。

5.根据权利要求1所述的一种共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，利用高碘酸钠氧化法合成氧化度为40％～100％的醛基化透明质酸的具体过程为：在质量浓度为0.1～10％透明质酸水溶液中加入透明质酸中重复结构单元摩尔数0.4～1.0的高碘酸钠，室温下避光反应2～24h，然后加入与高碘酸钠摩尔比≥1:1的乙二醇终止反应，在去离子水中透析纯化24～72h，得到理论氧化度为40～100％醛基化透明质酸。

6.根据权利要求5所述的一种共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子的制备方法，其特征在于，透明质酸的分子量为2kDa～200kDa；

步骤(1)中溶液的浓度为1～10mg/mL，阿霉素水溶液的浓度为1～10mg/mL。

7.根据权利要求1所述的一种共载阿霉素和吲哚菁绿的多糖基纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤(2)中水溶性壳聚糖为羟乙基壳聚糖与羟丙基壳聚糖、羧甲基壳聚糖或羧丙基壳聚糖，水溶性壳聚糖的分子量为2kDa～200kDa，脱乙酰度为60％～90％，水溶液的浓度为1～10mg/mL，吲哚菁绿溶液的浓度为1～10mg/mL；

步骤(3)中溶液A与溶液B的浓度均为2.0mg/mL。