[发明专利]从人粪便样本中提取DNA的试剂盒、提取方法及应用

权利要求书

1.一种从人粪便样本中提取DNA的试剂盒,其特征在于，包括样品保存液、细胞裂解液、DNA沉淀剂、DNA洗涤剂、DNA提取液和DNA洗脱液；所述样品保存液的组分包括三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液、氯化钠、硫酸铵和乙二胺四乙酸；所述细胞裂解液的组分包括异硫氰酸胍、螯合剂、二硫苏糖醇、TritonX-100和pH调节剂；所述DNA提取液的组分包括盐酸胍，所述DNA沉淀剂为无水乙醇或异丙醇。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒不包含细胞捕获剂；所述DNA洗涤剂为75％的乙醇。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样品保存液组分的浓度为：三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液100mmol/L、氯化钠5mmol/L、硫酸铵50mmol/L、乙二胺四乙酸50mmol/L。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解液组分的浓度为：异硫氰酸胍472.5g/L、乙二胺四乙酸20mmol/L、二硫苏糖醇32.5mmol/L、TritonX-100 4％v/v；所述pH调节剂为Tris-HCl缓冲液，所述细胞裂解液的pH为6.5。

5.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA提取液中盐酸胍的浓度为：573g/L；DNA洗脱液为pH为8.0的TE缓冲液；所述细胞捕获剂的组成成分包括PEG6000和氯化钠。

6.一种从人粪便样本中提取DNA的提取方法，其特征在于，采用权利要求1-5任意一项所述的试剂盒进行提取，所述提取方法包括如下步骤：

1)将粪便样品与保存液混合均匀，制备得粪便悬液；

2)将粪便悬液离心后取粪便上清液，在粪便上清液中加入细胞裂解液，混匀，50-70℃孵育20分钟，得到混合液Ⅰ；

3)向混合液Ⅰ中加入DNA沉淀剂，混匀，离心后舍弃上清液，保留沉淀；

4)加入DNA提取液到步骤3)得到的沉淀中，混匀，直至沉淀消失，得到混合液Ⅱ；

5)将混合液Ⅱ转移至DNA吸附柱中，离心；

6)向DNA吸附柱中加入DNA洗涤剂洗涤DNA吸附柱，再对吸附柱进行离心；

7)用DNA洗脱液将DNA从DNA吸附柱上洗脱下来，得到洗脱液即为DNA样本液；此步骤包括将DNA吸附柱放入离心管，用DNA洗脱液洗涤DNA吸附柱，并将离心管放入离心机10000rpm离心2min得到DNA样本液。