[发明专利]一种暗褐脉柄牛肝菌多糖的制备方法

说明书

本发明公开了一种暗褐脉柄牛肝菌多糖的制备方法，过程包括：将暗褐脉柄牛肝菌菌丝接种于液体发酵培养基中，进行发酵，得发酵液；对所得发酵液进行浓缩，得浓缩液；对所得浓缩液进行离心，取上清液，并向上清液中加入乙醇，离心，收集沉淀，冷冻干燥，得粗多糖；制备粗多糖溶液，以DEAE‑52纤维素柱对粗多糖溶液进行洗脱，并对洗脱液浓缩，得粗多糖浓缩液；将所得粗多糖浓缩液装入透析袋中进行透析，并对透析液冷冻干燥，得暗褐脉柄牛肝菌多糖。该方法提高了暗褐脉柄牛肝菌多糖的纯度，便于后续对真菌多糖结构和组成的探究，为暗褐脉柄牛肝菌多糖药用价值的研制拓宽了发展空间和途径。

技术领域

本发明涉及多糖提取技术领域，更具体地说是涉及一种暗褐脉柄牛肝菌多糖的制备方法。

背景技术

暗褐脉柄牛肝菌[Phlebopus portentosus(Berk.Broome)Boedijn]为小牛肝菌科(Boletinellaceae)，脉柄牛肝菌属(Phlebopus)真菌，又名暗褐网柄牛肝菌，俗称“黑牛肝菌”。主要分布在中国海南、云南和广西等地区。暗褐脉柄牛肝菌不仅味道好，而且还含有各类营养成分，如氨基酸、多糖、蛋白质等，是营养成分较高的一种食用菌。

暗褐脉柄牛肝菌中含有大量的真菌多糖，实验研究发现，真菌多糖对小鼠的心脏具有保护作用，且可明显抑制小鼠体内的肾癌细胞。但是，目前暗褐脉柄牛肝菌多糖的分离、纯化方法获得的多糖纯度较低，很难对暗褐脉柄牛肝菌多糖的结构和组成进行研究，也无法将其应用于实际生产中。

因此，如何提供一种暗褐脉柄牛肝菌多糖的制备方法是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种暗褐脉柄牛肝菌多糖的分离纯化方法，便于后续对真菌多糖结构和组成的探究，为暗褐脉柄牛肝菌多糖药用价值的研制拓宽了发展空间和途径。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种暗褐脉柄牛肝菌多糖的制备方法，包括下述步骤：

1)制备发酵液：将暗褐脉柄牛肝菌菌丝接种于液体发酵培养基中，进行发酵，得发酵液；

2)浓缩：对步骤1)所得发酵液进行浓缩，得浓缩液；

3)离心、醇沉、干燥：对步骤2)所得浓缩液进行离心，取上清液，并向上清液中加入乙醇，离心，收集沉淀，冷冻干燥，得粗多糖；

4)洗脱、浓缩：制备粗多糖溶液，以DEAE-52纤维素柱对粗多糖溶液进行洗脱，并对洗脱液浓缩，得粗多糖浓缩液；

5)纯化、干燥：将步骤4)所得粗多糖浓缩液装入透析袋中进行透析，并对透析液冷冻干燥，得暗褐脉柄牛肝菌多糖。

以上技术方案达到的技术效果是：暗褐脉柄牛肝菌多糖主要存在于暗褐脉柄牛肝菌的发酵液中，为了获得大量的发酵液，将菌丝接种于液体培养基中进行培养，以此来获得提取暗褐脉柄牛肝菌多糖的原料；对发酵液进行浓缩，可以减少发酵液体积，便于离心；利用乙醇能够溶解小分子杂质、而不溶解多糖等大分子的特性，初步对暗褐脉柄牛肝菌多糖进行沉淀，得到了暗褐脉柄牛肝菌粗多糖，粗多糖中含有多糖、蛋白质等杂质，因此对沉淀进行洗脱和纯化可去除其中的杂质，获得纯度较高的暗褐脉柄牛肝菌多糖。本发明对粗多糖进行DEAE-52纤维素柱洗脱、透析两步纯化，显著提高了暗褐脉柄牛肝菌多糖的得率和纯度。

作为本发明优选的技术方案，步骤1)中，所述发酵为在25～32℃、100～200r/min下恒温培养10～15d。

以上技术方案达到的技术效果是：25～32℃下，菌丝可以快速生长，便于在短时间内获得多糖含量高的液体发酵液；恒温培养的时间决定了菌丝的生长量，若时间过长，发酵液的营养不能满足菌丝生长的需求，造成菌丝的老化，因此，在25～32℃下培养10～15d时，既可以使得菌丝正常生长，又可以获得多糖含量高的液体发酵液。