[发明专利]用于新型冠状病毒检测的引物及恒温显色筛查试剂盒

权利要求书

1.2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因双重恒温显色扩增内外环引物组，其特征在于，所述引物组为(1)或(2)：

(1)外引物1：

5′-GACATCACATACAGTAATGCC-3′；

5′-TGTATACACTATGCGAGCAG-3′；

内引物1：

5′-CTCATCTGAGATATTGAGTGTTGGGTACCTACACTAGTGCCACA-3′；

5′-AAGTATTCTACACTCCAGGGACCGGTAGTAGAGAGCTAGGCC-3′；

环引物1：

5′-GCCAGTAATTCTAACATAGTGCT-3′；

5′-GGTACTGGTAAGAGTCATTTTGC-3′；

(2)外引物2：

5′-CCCCAAAATCAGCGAAATGC-3′；

5′-CCACCACGAATTCGTCTGG-3′；

内引物2：

5′-CGTTGTTTTGATCGCGCCCCTTTCATTACGTTTGGTGGACCCT-3′；

5′-AATTCCCTCGAGGACAAGGCGTTTTAGCTCTTCGGTAGTAGCCA-3′；

环引物2：

5′-TGGTTACTGCCAGTTGAATC-3′；

5′-TAACACCAATAGCAGTCCAGATG-3′。

2.一种根据权利要求1所述引物组进行2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因检测的双重恒温显色筛查方法。

3.一种根据权利要求1所述引物组进行2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因检测的双重恒温显色筛查试剂盒。

4.如权利要求3所述的2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因检测的双重恒温显色筛查试剂盒，其特征在于，包括以下组分：

反应液S-1，Bst聚合酶B-1，逆转录酶R-1，阳性对照PG-1，阴性对照NG-1；

所述反应液S-1包括3.2μM内引物，0.4μM外引物，1.6μM环引物；所述内引物、外引物、环引物均来自引物组(1)或均来自引物组(2)。

5.如权利要求4所述的2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因检测的双重恒温显色筛查试剂盒，其特征在于，以单份样本加入量25μL计，所述反应液S-1加入量为20.8μL，包括8×10⁵U/L RNasin、200mM dNTPs、10mM pH＝8.3的Tris-HCl，、20mM KCl、3.5mM MgCl₂、0.8Mbetaine、3.2μM内引物、0.4μM外引物、1.6μM环引物和HNB。

6.如权利要求4所述的2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因检测的双重恒温显色筛查试剂盒，其特征在于，以单份样本加入量25μL计，所述Bst聚合酶B-1的添加量为2μL，浓度为10⁵U/L。

7.如权利要求4所述的2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因检测的双重恒温显色筛查试剂盒，其特征在于，以单份样本加入量25μL计，所述逆转录酶R-1的添加量为0.2μL，浓度为10⁵U/L，浓度为4×10⁶U/L。

8.如权利要求4所述的2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因检测的双重恒温显色筛查试剂盒，其特征在于，以单份样本加入量25μL计，使用所述试剂盒时，RNA模板的添加量为2.0μL，共1～100ng。